出血性大肠杆菌O157:H7检测试剂盒说明书
广州健仑生物科技有限公司
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(一)生化管的使用方法
本安瓿瓶已在凹颈处有割口,请以瓶子上的蓝点为受力点,用手以柔力掰开(注意:如安瓿瓶上没有蓝点的,则用砂轮在安瓿瓶的凹颈处划痕,然后再掰开)!本鉴定盒配套的塑料帽已灭菌。所有的安瓿瓶、吸塑架、塑料帽在使用后均高压灭菌后方可弃去。
(二)出血性大肠杆菌O157:H7生化鉴定盒的详细使用方法
出血性大肠杆菌O157:H7为革兰氏阴性杆菌,需氧或兼性,有周鞭毛,并有菌毛,不产生芽孢的杆菌。发酵乳糖,不发酵或迟缓发酵山梨醇。氧化酶阴性。MUG阴性。从分离培养平板上挑取可疑菌苔接种于每种微量生化管内。将已接种的生化管套上无菌塑料帽,直立于三折吸塑短架内,于35-37℃培养箱中培养,结果观察见表1。注意:如有特殊的接种方式或培养时间,请详见每种生化管附带的使用说明。
表1
产品名称 | 结果判定 | 培养时间 (小时) | 使用说明 | |
阳性 | 阴性 | |||
山梨醇 | 黄色 | 紫色 | 8-24 |
|
纤维二糖 | ||||
棉子糖 | ||||
蛋白胨水 | 红色 | 不变色 | 24 | 培养后加靛基质试剂2-3滴,立即观察结果。 |
西蒙氏枸橼酸盐 | 蓝色 | 不变色 | 24-48 | 用接种针挑取新鲜菌苔在斜面上划“之”字形接种,竖立培育。 |
鸟、赖氨酸脱羧酶 | 试验管蓝绿色, 对照管变黄 | 试验管与对照管均变黄 | 18-24 | 每株被检菌应同时接种氨基酸对照管一支,并加灭菌液体石蜡5-8滴覆盖培养基表面。培养18-24小时,未见阳性结果,继续培养4天,再做终结果判定。 |
半固体琼脂 | 扩散生长 | 无扩散生长 | 24—48 | 用接种针挑取新鲜菌苔穿刺接种,竖立培育。 |
三糖铁琼脂 | 产酸变黄色, 产硫化氢变黑色 | 不变色 | 24 | 用接种针挑取新鲜菌苔穿刺,穿刺完毕后在斜面上划“之”字形接种,竖立培育。 |
葡萄糖磷酸盐胨水 | MR: 红色 | 不变色 | 96 | 培养后加MR试剂2-3滴,立即观察结果。 |
VP: 红色 | 不变色 | 48 | 培养后依次加入8滴VP试剂甲液及4滴乙液,混匀,再培养10-20分钟观察结果。 |
试验项目 | 结果判定 |
山梨醇 | 阴性或迟缓 |
纤维二糖 | 阴性 |
棉子糖 | 阳性 |
蛋白胨水 | 阳性 |
西蒙氏枸橼酸盐 | 阴性 |
鸟氨酸脱羧酶 | 阳性 |
赖氨酸脱羧酶 | 阳性 |
半固体琼脂 | 有动力或无动力 |
三糖铁琼脂 | 底及斜面呈黄色H2S阴性 |
葡萄糖磷酸盐胨水 | MR 阳性 VP 阴性 |
备注:本鉴定盒是按照产品目录中的品种成份从左到右的顺序摆放。
(三)出血性大肠杆菌O157:H7的和生化鉴定特征(见表2)
表2 大肠杆菌O157:H7的生化特征
试验项目 | 结果判定 |
山梨醇 | 阴性或迟缓 |
纤维二糖 | 阴性 |
棉子糖 | 阳性 |
蛋白胨水 | 阳性 |
西蒙氏枸橼酸盐 | 阴性 |
鸟氨酸脱羧酶 | 阳性 |
赖氨酸脱羧酶 | 阳性 |
半固体琼脂 | 有动力或无动力 |
三糖铁琼脂 | 底及斜面呈黄色H2S阴性 |
葡萄糖磷酸盐胨水 | MR 阳性 VP 阴性 |
注:“+” 阳性; “—” 阴性 ;“+/-” 阳性或阴性
凡用于上述方法在被检食品中分离获得的纯菌落,经用抗E.coli O157:H7标准血清或EHEC O157:H7。乳胶凝集试剂测试,呈阳性结果即可报告为该食品试样中检出肠出血性大肠杆菌O157:H7。