蓝耳病病毒抗体检测试剂盒说明书

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【原理】

        猪繁殖与呼吸障碍综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS）又称蓝耳病，是由猪PRRS病毒引起的一种猪传染病。蓝耳病是以母猪妊娠后期发生流产、死产和产木乃伊胎，新生仔猪死亡率高，各年龄猪（尤其是仔猪）出现异常呼吸为特征的传染性繁殖障碍病。其主要临床特征是厌食、发热、繁殖和呼吸障碍。检测特异性猪蓝耳病抗体可作为猪蓝耳病疫苗的免疫监测及该病辅助检测指标。

        本试剂盒采用ELISA方法检测猪血清中特异性猪蓝耳病抗体。本试剂灵敏度高，特异性强，重复性好，操作方便快速，可分多次使用。

【试剂组成】

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1.预包被板

48T/96T;

7. 终止液（6号液）

1支;

2.酶结合物（1号液）

1支;

8. 阳性对照品

1支;

3.浓缩洗涤液（2号液）

1支;

9. 阴性对照品

1支;

4.底物（3号液）

1支;

10.不干胶膜

1/2片;

5.显色剂（4号液）

1支;

11.自封袋

1个;

6.样本稀释液（5号液）

1支;

12.使用说明书

1份;

【操作程序】

1． 洗涤液配制 用蒸馏水或去离子水将浓缩洗涤液（2号液）按1：10稀释，如取50ml浓缩液与450ml蒸馏水或去离子水充分混匀即为工作洗涤液。

2． 样本稀释   用样本稀释液（5号液）将待检血清样本按1：40稀释，如取5ul样本与195ul样本稀释液，混匀。阴性、阳性对照品不用稀释，直接加样。

3． 加样反应   每次试验设阴性对照2孔、阳性及空白对照各1孔（分别加入阴性、阳性对照及样本稀释液100ul）。样本检测孔每孔加已稀释血清样本100ul。37℃避光反应30分钟后，甩去孔内液体，每孔注满工作洗涤液洗涤3次，每次均需停留1分钟后再甩净，拍干。

4． 加酶反应   除空白对照孔外，每孔加酶结合物（1号液） 1滴。37℃避光反应30分钟后，甩去孔内液体，如上洗涤，拍干。

5． 显色反应   加底物液（3号液）和显色剂（4号液）各1滴，混匀，37℃避光显色10分钟。加终止液（6号液）1滴，终止反应（加终止液后，蓝色会变为黄色）并判读结果。

【结果判断】

      阴性对照呈无色或浅黄色，阳性对照呈明显黄色，表示试验有效。

      以空白对照调零，用酶标仪于450nm（630nm作参比波长）读取吸光度（A值）。待检孔A值大于阴性对照A值平均值的2.1倍者判为阳性。如阴性对照A值的平均值低于0.08时按0.08计算。

【注意事项】

      1.试剂盒于2-8℃保存，有效期12个月。每次使用前应先平衡至室温。

      2.未使用完的板条应密封保存。

      3.试剂盒中终止液具有腐蚀性，要小心使用。

      4.瓶盖每次使用后要拧紧，各瓶盖之间不可混用。不同批号试剂盒的试剂组份不可混用。

      5.试验样本应为无染菌、无血脂、无溶血的血清。任何样本都应视为传染源妥善处理。

      6. 37℃孵育时，建议使用水浴箱。如无条件，可在温箱中放置湿盒进行反应并同时用不干胶膜封盖板孔。

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