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诺如病毒胶体金检测试纸

诺如病毒胶体金检测试纸

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诺如病毒胶体金检测试纸
为快速、多步法侧流免疫层析检测,应用了抗诺如病毒抗原的单克隆抗体,可以快速检测出诺如病毒。

  • 产品描述

诺如病毒胶体金检测试纸

广州健仑生物科技有限公司

 

诺如病毒,又称诺瓦克病毒是人类杯状病毒科(Human Calicivirus,HuCV)中诺如病毒(Norovirus,NV)属的一种病毒。是一组形态相似、抗原性略有不同的病毒颗粒。

诺如病毒感染性腹泻在*范围内均有流行,全年均可发生感染,感染对象主要是成人和学龄儿童,寒冷季节呈现高发。美国每年在所有的非细菌性腹泻暴发中,60-90%是由诺如病毒引起。荷兰、英国、日本、澳大利亚等发达国家也都有类似结果。在中国5岁以下腹泻儿童中,诺如病毒检出率为15%左右,血清抗体水平调查表明中国人群中诺如病毒的感染亦十分普遍。

“诺如病毒”感染性腹泻属于自限性疾病,没有疫苗和*药物,公众搞好个人卫生、食品卫生和饮水卫生是预防本病的关键,要养成勤洗手、不喝生水、生熟食物分开,避免交叉污染等健康生活习惯。

潜伏期多在24~48h,zui短12h,zui长72h。感染者发病突然,主要症状为恶心、呕吐、发热、腹痛和腹泻。儿童患者呕吐普遍,成人患者腹泻为多,24h内腹泻4~8次,粪便为稀水便或水样便,无粘液脓血。大便常规镜检WBC<15,未见RBC。原发感染患者的呕吐症状明显多于续发感染者,有些感染者仅表现出呕吐症状。此外,也可见头痛、寒颤和肌肉痛等症状,严重者可出现脱水症状。

【包装规格】

20 测试/盒

【预期用途】

诺如病毒胶体金检测试纸 用于体外诊断。诺如病毒抗原快速检测试剂卡(免疫层析法)是用

免疫层析的方法快速定性

测定人粪便样本中,基因1型(GGI)和基因2型(GGII)的诺如病毒。该试剂可以协助诊断胃肠

炎,分析有疑似诺如病毒胃肠炎症状的儿童和成人的粪便样本。

【主要组成成分】

试剂盒内的试剂足够进行20次检测

测试卡 Cassette 20次检测 内装20个独立包装的测试卡

稀释缓冲液 Diluent 30 ml 样本稀释缓冲液,氯化钠蛋白缓冲液,含0.1% Kathon CG;

开瓶即用,蓝色洗液 Wash 10ml 洗液,磷酸化的氯化钠,含0.1% Thimerosal,开瓶即用

酶标记物1 Conjugate│1 7ml 稳定蛋白溶液中的生物素标记的抗诺如病毒抗体,开瓶即用,

酶标记物2 Conjugate│2 5ml 稳定蛋白溶液中的链霉菌过氧化物酶,开瓶即用

底物 Substrate 7ml 过氧化氢/TMB,开瓶即用吸液管 Pipet 25支 每包中装有25支有刻度标记的一次性塑料吸样管

【储存条件及有效期】

4-30°C保存,必须在有效期前使用。过有效期之后,产品的质量保证不再有效。同样,如果检测卡的外壳破损将会使检测卡潮湿,我们将不能保证检测卡适合使用。

有效期:6个月

【样本要求】

粪便样本必须使用没有任何添加剂的干净容器收集,试验前储存于温度应为2-8 °C。在病人症状出现后(腹泻和呕吐),应尽快进行样本采集,因为症状出现后1-3 天,病毒的清除达到zui大化。如果标本保存时间超过3 天,必须储存于-20 °C。在实验开始前,冷冻的样本必须充分解冻,回复至室温。与新鲜样本一样,复温的样本也必须在检测前,和试剂充混合。应避免样本多次冻融。

采用直肠拭子采集样本时,必须得到足够的粪便样本(大约100 mg)以确保检测进行。

【检测方法】

1.常规信息

检测前,样本、稀释缓冲液、试剂和检测卡必须恢复至室温(20 - 25 °C)。检测卡必须在即将使用前才可以从外包装中取出,检测卡一旦从外包装中取出或被使用,则不可以再次使用。检测不可以在阳光直射下进行。

2.准备样本悬浊液

取1 ml样本稀释缓冲液Diluent 加入贴好标签的试管内。对于液态粪便样本,可用盒内的一次性吸液管Pipet 吸取100 μl样本(至吸液管的第二个增粗处),悬空滴加于事先已加入提取缓冲液的标记试管中;对于固态粪便样本,取50-100mg样本(豌豆大小)加入缓冲液中。样本必须被混匀,可利用试管反复吸放,或者用漩涡混匀器将粪便悬浮液混匀。至少沉淀2分钟后,取200- 500 μl上清液置于另一干净试管中(或者未包被的微孔中)。

3.将检测卡Cassette从外包装中取出,将其放置在水平的垫子上。

4.用已经处理过同一样本的一次性吸管,从粪便悬浊液中吸取250 μl上清液(*个标记处),

加入干净的、标记的试管中。

5.在试管中加入6 滴酶标记物1 Conjugate│1(滴加时保持小瓶垂直)。

6.通过吸放的方式将混合液*混匀后,用一次性吸管将其全部吸出,以缓慢平稳连贯的水流,注入检测卡的加样孔中。将吸管倾斜约 45°},管口指向反应窗,这样混合物就可以全部流至反应窗内。__

7.将检测卡在室温下(20 - 25 °C)孵育10 分钟。确保反应窗的检测膜已被样本混合液充分浸湿,否则请将100 μl 稀释缓冲液滴入加样孔中。

8.在反应窗中加入4 滴酶标记物2 Conjugate│2(滴加时保持小瓶垂直),再于室温下孵育至少1分钟。

9.在反应窗中,加入10滴洗液 Wash,待洗液被*吸收后,再进行后续操作。

10.在反应窗中加入6 滴底物 Substrate(滴加时保持小瓶垂直)。

11.之后的3分钟内,读出检测结果。在3分钟后出现的有色条带,没有诊断意义

【参考值(参考范围)及检验结果的解释】

1. 在加入底物后3 分钟之内,在良好采光直视下读出的检测结果,是zui可靠的。

2. 查看在反应窗的“C”标记处,是否有出现蓝色的条带(所谓的内部质控线),在反应窗的“T”标记处是否出现蓝色的条带(所谓的检测线)。颜色的强度可能会由浅变深。

3. 阳性结果:加入底物之后3 分钟内,如果同时出现两条蓝色的条带(检测线“T”和质控线“C”),可判别为阳性结果。颜色可由浅变深。如果条带只有部分清晰出现,也可以解释为阳性。膜的其他颜色改变或其他部位的阴影,都不能解释为阳性结果。

4. 阴性结果:加入底物的3 分钟后,就可以开始判别是否为阴性结果或无效结果了。如果只在反应窗的质控带“C”处出现蓝色的条带,在检测带“T”处没有蓝色条带出现,则可判定为阴性结果。阴性结果说明,在样本中没有诺如病毒的抗原存在,或抗原的量低于检测限。

5. 无效结果:在反应窗的检测带“T”和质控带“C”处,均无蓝色条带出现,或者只在检测带

“T”出现条带,这两种情况均说明检测无效,需要用新的检测卡重新进行检测。

诺如病毒抗原快速检测卡(免疫层析法)检测结果的解释:

【注意事项】

1. 仅用于体外诊断。

2. 实验必须由经过专业培训的人员操作。必须严格按照医学实验室的规章制度操作。

3. 产品操作时必须严格按照说明书操作。

4. 样品稀释缓冲液中含有Kathon CG 作为防腐剂,此物质不能接触皮肤或粘膜。

5. 样本和试剂不可以用嘴吸取。

6. 样本和试剂避免接触受伤的皮肤或者粘膜。

7. 处理样本时应该戴一次性手套,完成试验后要洗手。

8. 禁止在样本和试剂实验区域内吸烟、吃东西或喝水。

9. 所有试剂和材料如果接触有潜在感染性的样本,应与样本一样,立即用适当的消毒剂(如:

次氯酸钠)或者高压高温121℃至少1 小时处理。

10. 诺如病毒抗原快速检测试剂卡(免疫层析法)必须在效期内使用。所有的试剂都被调整

为zui适宜的活性状态。稀释或改变这些试剂将减少其活性。如果不按照说明中的时

间和温度进行操作,将会导致错误的结果。

11. 不同批号的诺如病毒抗原快速检测试剂卡(免疫层析法)试剂盒中的试剂不可以混用。

12. 试剂和样本必须避免微生物的污染,否则将会影响检测结果。

13. 吸取每个样本时,必须使用不同的吸管,以防止交叉污染及错误结果

14. 每个检测卡只可使用一次

试剂盒组成

测试卡     Cassette      20次检测   内装20个独立包装的测试卡

稀释缓冲液 Diluent       30 ml 样本稀释缓冲液,氯化钠蛋白缓冲液,即用,含0.1% Kathon CG;开瓶即用,蓝色

洗液      Wash          10ml 洗液,磷酸化的氯化钠,含0.1% Thimerosal,开瓶即用

酶标记物1 Conjugate│1   7ml 稳定蛋白溶液中的生物素标记的抗诺如病毒抗体,开瓶即用,蓝色

酶标记物2 Conjugate│2   5ml 稳定蛋白溶液中的链霉菌过氧化物酶,开瓶即用

底物       Substrate    7ml 过氧化氢/TMB,开瓶即用

吸液管     Pipet         25每包中装有25支有刻度标记的一次性塑料吸样管

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【公司名称】 广州健仑生物科技有限公司

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【电子邮件】Service@jianlun.com  

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【营销中心】 广州市中山大道中358号东溪商务大厦B座511室

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提取时,将无菌磁珠和粪便同时放入离心管震荡2次,每次30s,震荡间歇置于冰上孵化2min。zui后用Nanodrop进DNA浓度检测。
2.    DNA测序
每个样品构建一个文库,插入片段为350bp,测序策略:Illumina GAIIx、HiSeq 2000,PE100。
3.    DNA组装和基因集构建
(1)DNA组装:去除接头等低质量reads和宿主基因组DNA数据,得到平均每个样品6.13Gb,共1758 Gb细菌质量数据。73.7%的reads被组装成3200万个contigs,每个contigs长度均超过500个碱基,总的contig长度为45.7 GB。
(2)基因集构建:GeneMark用来预测每个样品contigs的开放性阅读框(ORFs);分别与人和小鼠进行一一比对,发现猪的肠道基因集整体平均ORF长度和组装的N50 contig长度较短。利用BLAT对所有样品基因进行成对比较构建非冗余基因集;基于NCBI-NR数据库通过CARMA3对基因进行分类;基于eggnog和KEGG数据库进行基因功能注释。
4.    数据分析方法
(1)分类分析:属、门、种水平的物种分类、MGS分析、KEGG功能基因分析、耐药基因分析。利用Bray-Curtis距离定义样品之间的差异,并通过二维非度量多维尺度法(NMDS)进行可视化。
(2)丰度计算:基于 fitZig函数中的zero-inflated细菌斯混合模型进行丰度计算。通过计算Spearman相关系数获得参与柠檬酸循环的耐药基因和酶的相关性。 为鉴定猪肠道宏基因组的性别差异,本文分别对来自两个不同农场相同品种的两组猪(*组:11头公猪,14头母猪;第二组:10头被阉割的公猪,10头母猪。两组猪饮食方式相同)进行分析,利用iPath2.0将公猪和母猪之间的差异基因或酶注释到KEGG代谢通路中。
(2)NR数据库比对得到的微生物基因和MGS(matagenomic species)

 

Extraction, the sterile beads and faeces into the centrifuge tube shock 2 times, each time 30s, shaking intermittently placed on ice incubation 2min. Finally use Nanodrop into the DNA concentration test.
DNA sequencing
A library was constructed for each sample with a 350 bp insert, sequencing strategy: Illumina GAIIx, HiSeq 2000, PE100.
3. DNA assembly and gene set construction
(1) DNA assembly: Low-quality reads and host genomic DNA data, such as linker, were removed to give an average of 6.13 Gb per sample for 1758 Gb of bacterial mass data. 73.7% of reads were assembled into 32 million contigs, each with contigs longer than 500 bases and a total contig of 45.7 GB.
(2) Construction of Gene Set: GeneMark was used to predict the open reading frames (ORFs) of contigs of each sample. One-to-one comparison with human and mouse respectively revealed that the overall average ORF length of the intestine gene sets in pigs and the N50 contig shorter length. Non-redundant gene sets were constructed by pairwise comparison of all sample genes using BLAT; genes were classified by CARMA3 based on the NCBI-NR database; and gene function annotations were based on eggnog and KEGG databases.
4 data analysis methods
(1) Classification analysis: Species classification of genera, genus, species, MGS analysis, KEGG functional gene analysis and drug resistance gene analysis. Differences between samples were defined using the Bray-Curtis distance and visualized by two-dimensional non-metric multidimensional scaling (NMDS).
(2) Abundance calculation: Abundance calculation is based on the zero-inflated mixture of bacteria and bacteria in fitZig function. Correlation between resistance genes involved in citric acid cycle and enzymes was obtained by calculating Spearman's correlation coefficient. To identify the gender differences in porcine gut macrogenomes, two groups of pigs of the same breed from two different farms (group 1: 11 boars, 14 sows; group 2: 10 castrated boars , 10 sows, two groups of pigs eating the same way) were analyzed using iPath 2.0 to annotate the differential genes or enzymes between the boar and sow into the KEGG metabolic pathway.
(2) Comparison of the NR database with the obtained microbial gene and MGS (matagenomic species)

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