大菌落脑膜炎奈瑟菌多群诊断血清

广州健仑生物科技有限公司

【储藏条件】

2~8℃避光保存，在标明的有效期内使用。

【有效期】

24个月

【产品名称】

通用名：脑膜炎奈瑟菌诊断血清英文名：antisera for N.meningitidis

【产品说明】

本套血清用于A、B、C、W、X、Y等6个常见血清QUN（serogroup）脑膜炎奈瑟菌的血清群鉴定，将相应血清群脑膜炎奈瑟菌制备灭活抗原，免疫家兔所得，血清产品经免疫吸附去除了非特异性凝集成分，具有效价高，特异性强的特点。

大菌落脑膜炎奈瑟菌多群诊断血清

【规格】

每种血清群1瓶，每瓶2ml，均为使用液。

【使用方法】

1.产品在使用前，由冰箱拿出，恢复温度到室温后使用。

2.样品分离培养物，经镜检和生化鉴定，确定为脑膜炎奈瑟菌后，再进行血清分群检测，如果未能确定为脑膜炎奈瑟菌，不宜直接进行血清凝集检测，以免产生假阳性结果。

3.待鉴定细菌在血平板或巧克力平板上，5% CO₂，培养48小时。

4.用酒精擦拭玻璃片。

5.用蜡笔或防水笔将玻璃片分为8个方格。

6. 在玻片每个方格的下半部分，用移液器加5%的福尔马林溶液（基于生物安全目的）。

7. 用无菌或一次性10μl接种环挑取BAP平板上过夜培养的细菌菌落。

8. 在玻片上将细菌与5%的福尔马林溶液混匀，混匀后的液体应该不透明，在加抗血清前应保持细菌悬液不干燥。

9. 在玻片的上方加10μl血清群特异的抗血清，同时在阴性对照侧加BS或者生理盐水。

10. 缓慢的混合细菌悬液和抗血清，使上部的抗血清和下部的细菌悬液充分混合1-2分钟。不要做旋转晃动，以免不同血清群的血清会相互混合污染。

11.在灯光下，黑暗背景条件下观察结果。1-2分钟内呈2+及以上凝集现象为阳性，1-2分钟内呈现2+以下凝集现象为阴性。如果过了2分钟，才发生的凝集反应按阴性处理。

【凝集反应的强度等级】

当抗血清与细菌接触，会引起凝集反应，使细胞（细菌）凝集或呈簇，细胞（细菌）上清液变得清亮，细胞悬液浓度或使用的抗血清浓度不同，会产生不同的强度的凝集反应，见图示

4+ 所有的细胞都发生凝集，细胞悬液清亮。

3+ 75%的细胞发生凝集，细胞上清略微浑浊不清。

2+ 50%的细胞发生凝集，细胞上清略微浑浊不清。

1+ 25%的细胞发生凝集，细胞上清略微浑浊不清。

+/- 少于25%的细胞发生凝集，可见有颗粒状的成分。

0 没有肉眼可见的凝集，上清悬液浑浊、平滑。

【血清群确定】

1. 1-2分钟内，出现3+或4+凝集为阳性反应（强阳性反应）。对于B群脑膜炎奈瑟菌来说，如果出现2+及以上的凝集则可认为阳性。

2. 阴性反应是+/-、1+ 或 2+（弱凝集）的凝集程度。

3. 当菌株仅与一种抗血清出现凝集，但和生理盐水不凝集时才能鉴定为该种血清型。

4. 如果不能确定血清群，菌株记为不能分群脑膜炎奈瑟菌（NG）。

5. 关于不能分群脑膜炎奈瑟菌（NG）菌株。

6. 在生理盐水中凝集，无论与任何抗血清发生强反应，都应标记为自凝菌。

7. 在生理盐水中不自凝，和多种血清出现凝集，记为NG。

8. 不和生理盐水凝集，也不和任何一个血清凝集也记作NG。

【结果难以判断时解决方案】

脑膜炎奈瑟菌具有可变性（有荚膜与无荚膜，小菌落与大菌落，慢生长与快生长，强凝集与弱凝集），有时候很难清除解释结果，一些建议如下：

1. 挑取同一平板上的另一个细菌克隆进行重复凝集试验。

2. 如果玻片上的结果不明确，将试管中配置悬液，重复该试验。

3. 加20µl抗血清直接涂于玻片上，直接加一环细菌进行混均凝集。

4. 再次培养，第二天进行重新试验。

5. 如果当天的平板上有各种大小不一的菌落，每种菌落再次分离纯培养，第二天每种菌落进行试验。大菌落一般会有比较好的凝集反应，小菌落次之。

6. 如果试验中的问题还是不能解决，应当和对照菌株同时进行试验，确保试剂的正确性。

【血清质量控制】

在对未知的菌落进行血清分群之前，应选用一套脑膜炎奈瑟菌参考菌株（A, B, C, W, X, Y）和一株可分群的脑膜炎奈瑟菌进行质量控制检测。操作步骤：

1. 新购进的每一批次抗血清要用参考菌株进行检测。

2. 半年后重复质量控制检测

3. 如果血清管暴露于超过4℃环境，或者怀疑血清被污染时，也要对血清进行重新的质量控制。

4. 关于血清分群和质量控制，每一批次的抗血清需要使用所有的参考菌株进行实验室验证，记录质量控制验证结果。

【血清质量控制检测结果判读】

1. 通过质量控制检测

与同源性的抗原反应，1-2分钟内，出现3+或 4+程度的凝集；单一血清群的抗血清不与其他血清群的脑膜炎奈瑟菌反应，不与NG菌株凝集反应，盐水不自凝。

2. 分群血清质量控制检测失败

如果抗血清与一种或多种参考菌株凝集反应，或/和NG参考菌株反应，盐水自凝，则血清不能使用。

【其他所需材料】

洁净玻片、生理盐水（0.85%的氯化钠溶液）、5%的福尔马林溶液、接种环或移液器。

【注意事项】

1. 本产品只能作为脑膜炎奈瑟菌血清型判定的辅助方法，zui终的判定需形态学、生化方法和血清学方法共同进行。

 2. 本产品应避免冷冻。反复冻融会使血清产生沉淀。

3. 本产品在保存过程中可能会产生浑浊或沉淀，这并不表示该产品已被污染。离心或者过膜去掉浑浊或沉淀后，可以正常使用。

4. 本产品含有0.1%*作为防腐剂，丢弃时需倒入下水管，并用大量的水冲洗下水管。

广州健仑生物公司提供SSI血清产品，包括沙门氏菌，志贺氏菌，大肠杆菌，肺炎链球菌，嗜血杆菌等。并且提供德国有名血清品牌SiFin的核心血清产品，德国SiFin血清质量好，实验*，已被各高校实验室，研究所列为推荐血清产品！详情可咨询工作人员！

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病原学检查
本菌属初次分离培养时多呈小球杆状，毒力菌株有菲薄的微荚膜

，经传代培养渐呈杆状，革兰氏染细菌阴性。
本菌为严格需氧菌。牛布氏杆菌在初次分离时，需在5～10%CO2环

境中才能生长，zui适温度37℃，zui适的pH6.6～7.1,营养要求高

，生长时需硫胺素，烟草酸和生物素，泛酸钙等，实验室常用肝

浸液培养基或改良厚氏培养基。此菌生缓慢，培养48小时后才出

现透明的小菌落，鸡胚培养也能生长。
在自然界中抵抗力较强，在病畜的脏器和分泌物中，一般能存活4

个月左右，在食品中约能生存2个月。对低温的抵抗力也强，对热

和消毒剂抵抗力弱。对链霉素、氯霉素和四环素等均敏感。
布氏杆菌具有二种抗原成份：A（牛布氏杆菌主要抗原成份）和M

（羊布氏杆菌主要抗原成份）。二种抗原在各种菌中含量不同，

牛布氏杆菌（Am）含a 抗原多，含M抗原少。羊布氏杆菌(aM)含M

抗原多，而含A抗原少。可利用凝集吸收试验制备出单因子血清～

～单价A或M血清，供菌种鉴定之用。
1976年美国费城退伍军人协会会员中曾爆发急性发热性呼吸道疾

病，经
研究，发现一种细菌命名为嗜肺军团菌。随后，许多有关细菌暂

被列入这一属，且追溯研究发现早在1943年即有军团人员病的病

例。现已提出了超过30种军团杆菌，至少19种是人类肺炎的病原

。其中zui常见病原体为嗜肺军团菌(占病例的85%~90%)，其次是L

。micdadei(占5%~10%)，再次是L。bozemanii和L。dumoffii。

此类细菌形态相似，具有共同的生化特征，引起类似疾病。[1] 
冷却水、冷凝水中嗜肺军团菌特征描述
嗜肺军团菌不抗酸，无孢子，无荚膜，类似于杆菌。不能分解明

胶、糖类或
是尿素，同时，不可参加酵解反应。嗜肺军团菌无细菌，也非自

身荧光。氧化酶与过氧化氢酶测试阳性。β-内酰胺酶阳性。
Etiological examination
The genus was isolated and cultured for the first time mostly small clubs, virulent strains have a meager micro-capsule

, Subculture gradually rod-shaped, Gram stain bacteria negative.
The bacteria for strict aerobic bacteria. Bovine brucellosis in the first separation, the need for 5 ~ 10% CO2 ring

The environment can grow, the optimum temperature of 37 ℃, the most suitable pH6.6 ~ 7.1, high nutritional requirements

, Need to grow thiamine, tobacco acid and biotin, calcium pantothenate, laboratory commonly used liver

Immersion medium or modified thick medium. This bacteria slow, cultured only 48 hours before

Now transparent small colonies, chicken embryo culture can grow.
Strong resistance in nature, in organs and secretions of sick animals, generally survive 4

About a month, about 2 months in food can survive. Resistance to low temperature is also strong, hot

And disinfectant resistance is weak. Streptomycin, chloramphenicol and tetracycline are sensitive.
Brucella has two antigenic components: A (the main antigen component of brucellosis) and M.

(Sheep brucellosis major antigen component). Two kinds of antigens in different bacteria content,

Bovine brucellosis (Am) contains more than a antigen, with less M antigen. Bovine brucellosis (aM) contains M

Antigens, and less with A antigen. Coagulation absorption test can be used to prepare single factor serum ~

~ Monovalent A or M serum, for identification of bacteria used.
In 1976, members of the Philadelphia Veterans Association of the United States had had an outbreak of acute febrile respiratory disease

Sick, after
Study and found a bacterium named Legionella pneumophila. After that, much about bacteria temporarily

Was included in this genus, and retrospective study found that as early as 1943 there are Legionnaires sick disease

example. More than 30 species of Legionella have been proposed and at least 19 are pathogenic to human pneumonia

. Legionella pneumophila is the most common pathogen (85% -90% of cases), followed by L

. micdadei (5% ~ 10%), again L. bozemanii and L. dumoffii.

Such bacteria are morphologically similar, have common biochemical characteristics and cause similar diseases. [1] 
Characteristics of Legionella pneumophila in cooling water and condensate
Legionella pneumophila not acid, no spores, no capsule, similar to bacilli. Can not be decomposed

Gum, sugar or
Is urea, at the same time, can not participate in the glycolysis reaction. Legionella pneumophila bacteria, nor from self

Body fluorescence. Oxidase and catalase test positive. β-lactamase-positive.