A群强凝集脑膜炎诊断血清

广州健仑生物科技有限公司

【储藏条件】

2~8℃避光保存，在标明的有效期内使用。

【有效期】

24个月

【产品名称】

通用名：脑膜炎奈瑟菌诊断血清英文名：antisera for N.meningitidis

【产品说明】

本套血清用于A、B、C、W、X、Y等6个常见血清QUN（serogroup）脑膜炎奈瑟菌的血清群鉴定，将相应血清群脑膜炎奈瑟菌制备灭活抗原，免疫家兔所得，血清产品经免疫吸附去除了非特异性凝集成分，具有效价高，特异性强的特点。

A群强凝集脑膜炎诊断血清

【规格】

每种血清群1瓶，每瓶2ml，均为使用液。

【使用方法】

1.产品在使用前，由冰箱拿出，恢复温度到室温后使用。

2.样品分离培养物，经镜检和生化鉴定，确定为脑膜炎奈瑟菌后，再进行血清分群检测，如果未能确定为脑膜炎奈瑟菌，不宜直接进行血清凝集检测，以免产生假阳性结果。

3.待鉴定细菌在血平板或巧克力平板上，5% CO₂，培养48小时。

4.用酒精擦拭玻璃片。

5.用蜡笔或防水笔将玻璃片分为8个方格。

6. 在玻片每个方格的下半部分，用移液器加5%的福尔马林溶液（基于生物安全目的）。

7. 用无菌或一次性10μl接种环挑取BAP平板上过夜培养的细菌菌落。

8. 在玻片上将细菌与5%的福尔马林溶液混匀，混匀后的液体应该不透明，在加抗血清前应保持细菌悬液不干燥。

9. 在玻片的上方加10μl血清群特异的抗血清，同时在阴性对照侧加BS或者生理盐水。

10. 缓慢的混合细菌悬液和抗血清，使上部的抗血清和下部的细菌悬液充分混合1-2分钟。不要做旋转晃动，以免不同血清群的血清会相互混合污染。

11.在灯光下，黑暗背景条件下观察结果。1-2分钟内呈2+及以上凝集现象为阳性，1-2分钟内呈现2+以下凝集现象为阴性。如果过了2分钟，才发生的凝集反应按阴性处理。

【凝集反应的强度等级】

当抗血清与细菌接触，会引起凝集反应，使细胞（细菌）凝集或呈簇，细胞（细菌）上清液变得清亮，细胞悬液浓度或使用的抗血清浓度不同，会产生不同的强度的凝集反应，见图示

4+ 所有的细胞都发生凝集，细胞悬液清亮。

3+ 75%的细胞发生凝集，细胞上清略微浑浊不清。

2+ 50%的细胞发生凝集，细胞上清略微浑浊不清。

1+ 25%的细胞发生凝集，细胞上清略微浑浊不清。

+/- 少于25%的细胞发生凝集，可见有颗粒状的成分。

0 没有肉眼可见的凝集，上清悬液浑浊、平滑。

【血清群确定】

1. 1-2分钟内，出现3+或4+凝集为阳性反应（强阳性反应）。对于B群脑膜炎奈瑟菌来说，如果出现2+及以上的凝集则可认为阳性。

2. 阴性反应是+/-、1+ 或 2+（弱凝集）的凝集程度。

3. 当菌株仅与一种抗血清出现凝集，但和生理盐水不凝集时才能鉴定为该种血清型。

4. 如果不能确定血清群，菌株记为不能分群脑膜炎奈瑟菌（NG）。

5. 关于不能分群脑膜炎奈瑟菌（NG）菌株。

6. 在生理盐水中凝集，无论与任何抗血清发生强反应，都应标记为自凝菌。

7. 在生理盐水中不自凝，和多种血清出现凝集，记为NG。

8. 不和生理盐水凝集，也不和任何一个血清凝集也记作NG。

【结果难以判断时解决方案】

脑膜炎奈瑟菌具有可变性（有荚膜与无荚膜，小菌落与大菌落，慢生长与快生长，强凝集与弱凝集），有时候很难清除解释结果，一些建议如下：

1. 挑取同一平板上的另一个细菌克隆进行重复凝集试验。

2. 如果玻片上的结果不明确，将试管中配置悬液，重复该试验。

3. 加20µl抗血清直接涂于玻片上，直接加一环细菌进行混均凝集。

4. 再次培养，第二天进行重新试验。

5. 如果当天的平板上有各种大小不一的菌落，每种菌落再次分离纯培养，第二天每种菌落进行试验。大菌落一般会有比较好的凝集反应，小菌落次之。

6. 如果试验中的问题还是不能解决，应当和对照菌株同时进行试验，确保试剂的正确性。

【血清质量控制】

在对未知的菌落进行血清分群之前，应选用一套脑膜炎奈瑟菌参考菌株（A, B, C, W, X, Y）和一株可分群的脑膜炎奈瑟菌进行质量控制检测。操作步骤：

1. 新购进的每一批次抗血清要用参考菌株进行检测。

2. 半年后重复质量控制检测

3. 如果血清管暴露于超过4℃环境，或者怀疑血清被污染时，也要对血清进行重新的质量控制。

4. 关于血清分群和质量控制，每一批次的抗血清需要使用所有的参考菌株进行实验室验证，记录质量控制验证结果。

【血清质量控制检测结果判读】

1. 通过质量控制检测

与同源性的抗原反应，1-2分钟内，出现3+或 4+程度的凝集；单一血清群的抗血清不与其他血清群的脑膜炎奈瑟菌反应，不与NG菌株凝集反应，盐水不自凝。

2. 分群血清质量控制检测失败

如果抗血清与一种或多种参考菌株凝集反应，或/和NG参考菌株反应，盐水自凝，则血清不能使用。

【其他所需材料】

洁净玻片、生理盐水（0.85%的氯化钠溶液）、5%的福尔马林溶液、接种环或移液器。

【注意事项】

1. 本产品只能作为脑膜炎奈瑟菌血清型判定的辅助方法，zui终的判定需形态学、生化方法和血清学方法共同进行。

 2. 本产品应避免冷冻。反复冻融会使血清产生沉淀。

3. 本产品在保存过程中可能会产生浑浊或沉淀，这并不表示该产品已被污染。离心或者过膜去掉浑浊或沉淀后，可以正常使用。

4. 本产品含有0.1%*作为防腐剂，丢弃时需倒入下水管，并用大量的水冲洗下水管。

广州健仑生物公司提供SSI血清产品，包括沙门氏菌，志贺氏菌，大肠杆菌，肺炎链球菌，嗜血杆菌等。并且提供德国有名血清品牌SiFin的核心血清产品，德国SiFin血清质量好，实验*，已被各高校实验室，研究所列为推荐血清产品！详情可咨询工作人员！

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一般是将被检材料接种于两个同样的选择培养基（每100毫升基础

培养基，如血清葡萄糖琼脂、血清马铃薯浸液琼脂、胰酶消化蛋

白胨琼脂、血清马丁汤琼脂中加入抑菌药物：细菌菌酮10毫克，

杆菌肽25单位，多粘菌素（B6单位）平板，一个置10%二氧化碳（

CO2）环境37℃培养，一个置普通温箱37℃培养，逐日观察，通常

在3-10天可出现生长，然后移植于血清葡萄糖琼脂纯化。如符合

下述全部条件，可认为是布氏杆菌属的细菌：细小的革兰氏阴性

球杆菌，无芽胞、荚膜和鞭毛，不运动，需氧，接触酶阳性，糖

发酵，甲基红试验（MR），维培试验（VP），吲哚、柠檬酸盐利

用等反应均为阴性，光滑型菌落能与布氏杆菌阳性血清凝集，粗

糙型菌落能与布氏杆菌R血清凝集。

在治疗上，大多数革兰氏阳性菌都对青霉素敏感（结核杆菌对青

霉素不敏感）；而革兰氏阴性菌则对青霉素不敏感（但奈瑟氏菌

中的流行性脑膜炎双球菌和淋病双球菌对青霉素敏感），而对链

霉素、氯霉素等敏感。所以首先区分病原菌是革兰氏阳性菌还是

阴性菌，在选择抗生素方面意义重大。
革兰氏阳性菌细胞壁较厚，约20～80nm。肽聚糖含量丰富，有15

～50层，每层厚度1nm,约占细胞干重的50～80%。此外，尚有大

量特殊组份磷壁酸(teichoic acid)。磷壁酸是由核糖醇

(ribitol)或甘油(glycerol)残基经由磷酸二键互相连接而成的

多聚物。磷壁酸分壁磷壁酸(wall teichoic acid)和膜磷壁酸

(membrane teichoic acid)两种，前者和细胞壁中肽聚糖的n-

乙酰胞壁酸连结，膜磷壁酸又称脂磷壁酸(lipteichoic acid)和

细胞膜连结，另一端均游离于细胞壁外。磷壁酸抗原性很强，是

革兰氏阳性菌的重要表面抗原；在调节离子通过粘肽层中起作用

；也可能与某些酶的活性有关；某些细菌的磷壁酸，能粘附在人

类细胞表面，其作用类似菌毛，可能与致病性有关。此外，某些

革兰氏阳性菌细胞壁表面还有一些特殊的表面蛋白，如a蛋白等，

都与致病有关。
The seeding material is generally seeded on two identical selection media (per 100 ml basis

Media such as serum glucose agar, serum potato agar, and tryptic digestion of eggs

Peanut agar, serum martin soup agar antibacterial drugs added: bacterial ketone ketone 10 mg,

Bacitracin 25 units, polymyxin (B6 unit) plates, one set of 10% carbon dioxide (

CO2) environment 37 ℃ culture, a common incubator 37 ℃ culture, daily observation, usually

Growth can occur between 3-10 days and then transplanted onto serum dextrose agar for purification. If consistent

All of the following conditions are considered to be bacteria of the genus Brucella: small, gram-negative

Coccobacillus, spore-free, capsular and flagellar, not motile, aerobic, contact-positive, sugar

Fermentation, Methyl red test (MR), Viter's test (VP), Indole, Citrate

With other reactions were negative, smooth colonies with brucella positive serum agglutination, crude

Rough colonies with Brucella R agglutination.

In therapy, most Gram-positive bacteria are susceptible to penicillin (Mycobacterium tuberculosis is green

Not sensitive to penicillin); Gram-negative bacteria are insensitive to penicillin (but Neisseria

Epidemic meningococcus and N. gonorrhoeae are susceptible to penicillin), while on the chain

Mycin, chloramphenicol and other sensitive. So first of all to distinguish the pathogen is gram-positive bacteria or

Negative bacteria, significant in the selection of antibiotics.
Gram-positive bacteria cell wall thicker, about 20 ~ 80nm. Peptidoglycan is abundant, 15%

~ 50 layers, each layer thickness of 1nm, accounting for about 50 to 80% of cell dry weight. In addition, there are still big

A special component of teichoic acid. The teichoic acid is made from ribitol

(ribitol) or glycerol residues are linked to each other via a phosphate bond

Polymers. Wall teichoic acid and membrane teichoic acid

(membrane teichoic acid) two, the former and cell wall peptidoglycan n-

Acetyl cell wall acid linkages, membrane teichoic acid, also known as lipoteichoic acid (lipteichoic acid) and

Cell membrane link, the other end are free from the cell wall. Ticinogenic antigenic strong, yes

An important surface antigen of Gram-positive bacteria; plays a role in regulating ions through the muco-peptide layer

; May also be related to the activity of certain enzymes; some bacterial teichoic acid, can adhere to humans

Similar cell surface, its role is similar to pili, may be related to pathogenicity. In addition, some

Gram-positive bacteria cell wall surface there are some special surface proteins, such as a protein, etc.,

Are related to the disease.