B群弱凝集脑膜炎诊断血清

广州健仑生物科技有限公司

【储藏条件】

2~8℃避光保存，在标明的有效期内使用。

【有效期】

24个月

【产品名称】

通用名：脑膜炎奈瑟菌诊断血清英文名：antisera for N.meningitidis

【产品说明】

本套血清用于A、B、C、W、X、Y等6个常见血清QUN（serogroup）脑膜炎奈瑟菌的血清群鉴定，将相应血清群脑膜炎奈瑟菌制备灭活抗原，免疫家兔所得，血清产品经免疫吸附去除了非特异性凝集成分，具有效价高，特异性强的特点。

B群弱凝集脑膜炎诊断血清

【规格】

每种血清群1瓶，每瓶2ml，均为使用液。

【使用方法】

1.产品在使用前，由冰箱拿出，恢复温度到室温后使用。

2.样品分离培养物，经镜检和生化鉴定，确定为脑膜炎奈瑟菌后，再进行血清分群检测，如果未能确定为脑膜炎奈瑟菌，不宜直接进行血清凝集检测，以免产生假阳性结果。

3.待鉴定细菌在血平板或巧克力平板上，5% CO₂，培养48小时。

4.用酒精擦拭玻璃片。

5.用蜡笔或防水笔将玻璃片分为8个方格。

6. 在玻片每个方格的下半部分，用移液器加5%的福尔马林溶液（基于生物安全目的）。

7. 用无菌或一次性10μl接种环挑取BAP平板上过夜培养的细菌菌落。

8. 在玻片上将细菌与5%的福尔马林溶液混匀，混匀后的液体应该不透明，在加抗血清前应保持细菌悬液不干燥。

9. 在玻片的上方加10μl血清群特异的抗血清，同时在阴性对照侧加BS或者生理盐水。

10. 缓慢的混合细菌悬液和抗血清，使上部的抗血清和下部的细菌悬液充分混合1-2分钟。不要做旋转晃动，以免不同血清群的血清会相互混合污染。

11.在灯光下，黑暗背景条件下观察结果。1-2分钟内呈2+及以上凝集现象为阳性，1-2分钟内呈现2+以下凝集现象为阴性。如果过了2分钟，才发生的凝集反应按阴性处理。

【凝集反应的强度等级】

当抗血清与细菌接触，会引起凝集反应，使细胞（细菌）凝集或呈簇，细胞（细菌）上清液变得清亮，细胞悬液浓度或使用的抗血清浓度不同，会产生不同的强度的凝集反应，见图示

4+ 所有的细胞都发生凝集，细胞悬液清亮。

3+ 75%的细胞发生凝集，细胞上清略微浑浊不清。

2+ 50%的细胞发生凝集，细胞上清略微浑浊不清。

1+ 25%的细胞发生凝集，细胞上清略微浑浊不清。

+/- 少于25%的细胞发生凝集，可见有颗粒状的成分。

0 没有肉眼可见的凝集，上清悬液浑浊、平滑。

【血清群确定】

1. 1-2分钟内，出现3+或4+凝集为阳性反应（强阳性反应）。对于B群脑膜炎奈瑟菌来说，如果出现2+及以上的凝集则可认为阳性。

2. 阴性反应是+/-、1+ 或 2+（弱凝集）的凝集程度。

3. 当菌株仅与一种抗血清出现凝集，但和生理盐水不凝集时才能鉴定为该种血清型。

4. 如果不能确定血清群，菌株记为不能分群脑膜炎奈瑟菌（NG）。

5. 关于不能分群脑膜炎奈瑟菌（NG）菌株。

6. 在生理盐水中凝集，无论与任何抗血清发生强反应，都应标记为自凝菌。

7. 在生理盐水中不自凝，和多种血清出现凝集，记为NG。

8. 不和生理盐水凝集，也不和任何一个血清凝集也记作NG。

【结果难以判断时解决方案】

脑膜炎奈瑟菌具有可变性（有荚膜与无荚膜，小菌落与大菌落，慢生长与快生长，强凝集与弱凝集），有时候很难清除解释结果，一些建议如下：

1. 挑取同一平板上的另一个细菌克隆进行重复凝集试验。

2. 如果玻片上的结果不明确，将试管中配置悬液，重复该试验。

3. 加20µl抗血清直接涂于玻片上，直接加一环细菌进行混均凝集。

4. 再次培养，第二天进行重新试验。

5. 如果当天的平板上有各种大小不一的菌落，每种菌落再次分离纯培养，第二天每种菌落进行试验。大菌落一般会有比较好的凝集反应，小菌落次之。

6. 如果试验中的问题还是不能解决，应当和对照菌株同时进行试验，确保试剂的正确性。

【血清质量控制】

在对未知的菌落进行血清分群之前，应选用一套脑膜炎奈瑟菌参考菌株（A, B, C, W, X, Y）和一株可分群的脑膜炎奈瑟菌进行质量控制检测。操作步骤：

1. 新购进的每一批次抗血清要用参考菌株进行检测。

2. 半年后重复质量控制检测

3. 如果血清管暴露于超过4℃环境，或者怀疑血清被污染时，也要对血清进行重新的质量控制。

4. 关于血清分群和质量控制，每一批次的抗血清需要使用所有的参考菌株进行实验室验证，记录质量控制验证结果。

【血清质量控制检测结果判读】

1. 通过质量控制检测

与同源性的抗原反应，1-2分钟内，出现3+或 4+程度的凝集；单一血清群的抗血清不与其他血清群的脑膜炎奈瑟菌反应，不与NG菌株凝集反应，盐水不自凝。

2. 分群血清质量控制检测失败

如果抗血清与一种或多种参考菌株凝集反应，或/和NG参考菌株反应，盐水自凝，则血清不能使用。

【其他所需材料】

洁净玻片、生理盐水（0.85%的氯化钠溶液）、5%的福尔马林溶液、接种环或移液器。

【注意事项】

1. 本产品只能作为脑膜炎奈瑟菌血清型判定的辅助方法，zui终的判定需形态学、生化方法和血清学方法共同进行。

 2. 本产品应避免冷冻。反复冻融会使血清产生沉淀。

3. 本产品在保存过程中可能会产生浑浊或沉淀，这并不表示该产品已被污染。离心或者过膜去掉浑浊或沉淀后，可以正常使用。

4. 本产品含有0.1%*作为防腐剂，丢弃时需倒入下水管，并用大量的水冲洗下水管。

广州健仑生物公司提供SSI血清产品，包括沙门氏菌，志贺氏菌，大肠杆菌，肺炎链球菌，嗜血杆菌等。并且提供德国有名血清品牌SiFin的核心血清产品，德国SiFin血清质量好，实验*，已被各高校实验室，研究所列为推荐血清产品！详情可咨询工作人员！

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广州健仑生物长期供应各种违禁品检测试纸、违禁品检测卡、违禁品检测试剂盒、药筛试纸、药筛试剂盒、吗啡检测试剂盒、巴比妥检测试剂盒等。检测范围：吗啡、巴比妥、尼古丁、KET、mamp、MDMA、BZO、THC、MTD、BAR、MDMA、AMP、BUP、PCP、TCA、OXY、MET等等。

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革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的细胞壁结构显著不同，导致这两

类细菌在染细菌性、抗原性、毒性、对某些药物的敏感性等方面

的很大差异。
革兰氏染细菌的结果取决于细菌细胞壁的结构即革兰氏染细菌原

理为：G﹢菌：细胞壁厚，肽聚糖网状分子形成一种透性障，当乙

醇脱细菌时，肽聚糖脱水而孔障缩小，故保留结晶紫-碘复合物在

细胞膜上。呈紫细菌。
Gˉ菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱细菌不能使其结构收缩，

其脂含量高,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细

胞壁，沙黄复染后呈红细菌。革兰氏阳性菌细胞壁厚约20-80nm，

有15-50层肽聚糖片层，含20-40%的磷壁酸。革兰氏阴性菌细胞

壁厚约10nm，仅2-3层肽聚糖，另外还有脂多糖、细菌外膜和脂蛋

白。
细菌菌（Actinomycete）是另一大类革兰氏阳性菌，根据DNA中

鸟嘌呤(G)和胞嘧啶(C)的含量，细菌菌被称为高G+C革兰氏阳性

菌，而厚壁菌被称为低G+C革兰氏阳性菌。如果细胞的第二层膜是

衍生特征，这两类革兰氏阳性菌可能是细菌基部的分支，否则它

们可能组成关系相对较近的单系群。它们被认为可能是古细菌和

真核生物的祖先，因为它们都缺乏第二层膜，并且具有一些生化

上的相似性，比如含有固醇类。此外，尽管恐球菌-栖热菌

(Deinococcus-Thermus)类细菌结构上类似革兰氏阴性菌，但也

可被染成革兰氏阳性。
虽然是革兰氏阴性的有机体，可是它巨大的感染力是来自于它独

特的细胞外膜小叶上包含有脂多糖抗原。
血清不仅用于血液凝集的研究，还可用于直接观察荧光标记过的

组织抗体。患者体内的特殊抗体可以被荧光抗体间接检测。这项

测试也已成功应用于酶联免疫吸附法与微量凝集试验。
嗜肺军团菌是一种细胞兼性寄生的细菌，可入侵变形虫，或是人

类的巨噬细胞内。

The cell wall structures of Gram-positive and Gram-negative bacteria are significantly different, leading to both

Bacteria in bacteria, antigenicity, toxicity, sensitivity to certain drugs and so on

The big difference.
The result of Gram-stain bacteria depends on the structure of the bacterial cell wall, Gram-stain bacterial origin

Reason: G + bacteria: cell wall thickness, peptidoglycan reticular molecules form a permeability barrier,

Alcohol off bacteria, peptidoglycan dehydration and pore narrowing, it retains the crystal violet - iodine complexes in the

Cell membrane. Was purple bacteria.
G ˉ bacteria: peptidoglycan thin layer, loosely crosslinked, ethanol bacteria can not shrink its structure,

The fat content is high, ethanol will dissolve the fat, the gap increases, Crystal Violet - iodine complex dissolution thin

Cell wall, sand yellow dye red bacteria. Gram-positive bacteria cell wall thickness of about 20-80nm,

There are 15-50 layers of peptidoglycan tablets containing 20-40% of teichoic acid. Gram-negative bacteria cells

Wall thickness of about 10nm, only 2-3 layers of peptidoglycan, in addition to lipopolysaccharide, bacterial outer membrane and lipid egg

White.
Actinomycete is another broad category of Gram-positive bacteria, according to DNA

The content of guanine (G) and cytosine (C), bacteria is called high G + C Gram positive

Fungi, while Fibrobacteria are called low G + C Gram-positive bacteria. If the cell's second membrane is

Derived characteristics, these two types of Gram-positive bacteria may be the base of the bacterium branch, otherwise it

They may form relatively monophyletic groups. They are thought to be archaebacteria and

Eukaryotic ancestors, because they both lack a second membrane and have some biochemistry

On the similarity, such as containing sterols. In addition, despite the Phoxiococcus - Thermus bacteria

(Deinococcus-Thermus) bacteria similar to the structure of Gram-negative bacteria, but also

Can be stained Gram-positive.
Although Gram-negative organisms, but its great appeal comes from it alone

Extracellular membrane leaflets contain lipopolysaccharide antigen.
Serum not only for blood coagulation research, can also be used for direct observation of fluorescently labeled

Tissue antibodies. Specific antibodies in the patient's body can be indirectly detected by fluorescent antibodies. this

The test has also been successfully applied to ELISA and microagglutination test.
Legionella pneumophila is a cell-facultative parasitic bacteria that can invade amoeba, or human

Class of macrophages.