脑膜炎慢生长诊断血清群

广州健仑生物科技有限公司

【储藏条件】

2~8℃避光保存，在标明的有效期内使用。

【有效期】

24个月

【产品名称】

通用名：脑膜炎奈瑟菌诊断血清英文名：antisera for N.meningitidis

【产品说明】

本套血清用于A、B、C、W、X、Y等6个常见血清QUN（serogroup）脑膜炎奈瑟菌的血清群鉴定，将相应血清群脑膜炎奈瑟菌制备灭活抗原，免疫家兔所得，血清产品经免疫吸附去除了非特异性凝集成分，具有效价高，特异性强的特点。

脑膜炎慢生长诊断血清群

【规格】

每种血清群1瓶，每瓶2ml，均为使用液。

【使用方法】

1.产品在使用前，由冰箱拿出，恢复温度到室温后使用。

2.样品分离培养物，经镜检和生化鉴定，确定为脑膜炎奈瑟菌后，再进行血清分群检测，如果未能确定为脑膜炎奈瑟菌，不宜直接进行血清凝集检测，以免产生假阳性结果。

3.待鉴定细菌在血平板或巧克力平板上，5% CO₂，培养48小时。

4.用酒精擦拭玻璃片。

5.用蜡笔或防水笔将玻璃片分为8个方格。

6. 在玻片每个方格的下半部分，用移液器加5%的福尔马林溶液（基于生物安全目的）。

7. 用无菌或一次性10μl接种环挑取BAP平板上过夜培养的细菌菌落。

8. 在玻片上将细菌与5%的福尔马林溶液混匀，混匀后的液体应该不透明，在加抗血清前应保持细菌悬液不干燥。

9. 在玻片的上方加10μl血清群特异的抗血清，同时在阴性对照侧加BS或者生理盐水。

10. 缓慢的混合细菌悬液和抗血清，使上部的抗血清和下部的细菌悬液充分混合1-2分钟。不要做旋转晃动，以免不同血清群的血清会相互混合污染。

11.在灯光下，黑暗背景条件下观察结果。1-2分钟内呈2+及以上凝集现象为阳性，1-2分钟内呈现2+以下凝集现象为阴性。如果过了2分钟，才发生的凝集反应按阴性处理。

【凝集反应的强度等级】

当抗血清与细菌接触，会引起凝集反应，使细胞（细菌）凝集或呈簇，细胞（细菌）上清液变得清亮，细胞悬液浓度或使用的抗血清浓度不同，会产生不同的强度的凝集反应，见图示

4+ 所有的细胞都发生凝集，细胞悬液清亮。

3+ 75%的细胞发生凝集，细胞上清略微浑浊不清。

2+ 50%的细胞发生凝集，细胞上清略微浑浊不清。

1+ 25%的细胞发生凝集，细胞上清略微浑浊不清。

+/- 少于25%的细胞发生凝集，可见有颗粒状的成分。

0 没有肉眼可见的凝集，上清悬液浑浊、平滑。

【血清群确定】

1. 1-2分钟内，出现3+或4+凝集为阳性反应（强阳性反应）。对于B群脑膜炎奈瑟菌来说，如果出现2+及以上的凝集则可认为阳性。

2. 阴性反应是+/-、1+ 或 2+（弱凝集）的凝集程度。

3. 当菌株仅与一种抗血清出现凝集，但和生理盐水不凝集时才能鉴定为该种血清型。

4. 如果不能确定血清群，菌株记为不能分群脑膜炎奈瑟菌（NG）。

5. 关于不能分群脑膜炎奈瑟菌（NG）菌株。

6. 在生理盐水中凝集，无论与任何抗血清发生强反应，都应标记为自凝菌。

7. 在生理盐水中不自凝，和多种血清出现凝集，记为NG。

8. 不和生理盐水凝集，也不和任何一个血清凝集也记作NG。

【结果难以判断时解决方案】

脑膜炎奈瑟菌具有可变性（有荚膜与无荚膜，小菌落与大菌落，慢生长与快生长，强凝集与弱凝集），有时候很难清除解释结果，一些建议如下：

1. 挑取同一平板上的另一个细菌克隆进行重复凝集试验。

2. 如果玻片上的结果不明确，将试管中配置悬液，重复该试验。

3. 加20µl抗血清直接涂于玻片上，直接加一环细菌进行混均凝集。

4. 再次培养，第二天进行重新试验。

5. 如果当天的平板上有各种大小不一的菌落，每种菌落再次分离纯培养，第二天每种菌落进行试验。大菌落一般会有比较好的凝集反应，小菌落次之。

6. 如果试验中的问题还是不能解决，应当和对照菌株同时进行试验，确保试剂的正确性。

【血清质量控制】

在对未知的菌落进行血清分群之前，应选用一套脑膜炎奈瑟菌参考菌株（A, B, C, W, X, Y）和一株可分群的脑膜炎奈瑟菌进行质量控制检测。操作步骤：

1. 新购进的每一批次抗血清要用参考菌株进行检测。

2. 半年后重复质量控制检测

3. 如果血清管暴露于超过4℃环境，或者怀疑血清被污染时，也要对血清进行重新的质量控制。

4. 关于血清分群和质量控制，每一批次的抗血清需要使用所有的参考菌株进行实验室验证，记录质量控制验证结果。

【血清质量控制检测结果判读】

1. 通过质量控制检测

与同源性的抗原反应，1-2分钟内，出现3+或 4+程度的凝集；单一血清群的抗血清不与其他血清群的脑膜炎奈瑟菌反应，不与NG菌株凝集反应，盐水不自凝。

2. 分群血清质量控制检测失败

如果抗血清与一种或多种参考菌株凝集反应，或/和NG参考菌株反应，盐水自凝，则血清不能使用。

【其他所需材料】

洁净玻片、生理盐水（0.85%的氯化钠溶液）、5%的福尔马林溶液、接种环或移液器。

【注意事项】

1. 本产品只能作为脑膜炎奈瑟菌血清型判定的辅助方法，zui终的判定需形态学、生化方法和血清学方法共同进行。

 2. 本产品应避免冷冻。反复冻融会使血清产生沉淀。

3. 本产品在保存过程中可能会产生浑浊或沉淀，这并不表示该产品已被污染。离心或者过膜去掉浑浊或沉淀后，可以正常使用。

4. 本产品含有0.1%*作为防腐剂，丢弃时需倒入下水管，并用大量的水冲洗下水管。

广州健仑生物公司提供SSI血清产品，包括沙门氏菌，志贺氏菌，大肠杆菌，肺炎链球菌，嗜血杆菌等。并且提供德国有名血清品牌SiFin的核心血清产品，德国SiFin血清质量好，实验*，已被各高校实验室，研究所列为推荐血清产品！详情可咨询工作人员！

我司还提供其它进口或国产试剂盒：登革热、疟疾、流感、A链球菌、合胞病毒、腮病毒、乙脑、寨卡、黄热病、基孔肯雅热、克锥虫病、违禁品滥用、肺炎球菌、军团菌、化妆品检测、食品安全检测等试剂盒以及日本生研细菌分型诊断血清、德国SiFin诊断血清、丹麦SSI诊断血清等产品。

广州健仑生物长期供应各种违禁品检测试纸、违禁品检测卡、违禁品检测试剂盒、药筛试纸、药筛试剂盒、吗啡检测试剂盒、巴比妥检测试剂盒等。检测范围：吗啡、巴比妥、尼古丁、KET、mamp、MDMA、BZO、THC、MTD、BAR、MDMA、AMP、BUP、PCP、TCA、OXY、MET等等。

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4.    可用ELISA、RIA及乳胶凝集等试验检测标本中该菌特异

性抗原或用PCR技术检查该菌核酸进行快速诊断。[1]  核酸扩增

技术，即聚合酶链式反应（polymerase chainreaction，PCR）

，其基本原理是设计、合成两条寡核苷酸，作为引物，对应于待

测病原微生物某一段特异性序列的两端，然后在体外模拟DNA体内

复制的过程反复扩增，使靶序列放大上万倍甚至上百万倍而被检

测出来
百日咳杆菌为卵圆形短小杆菌，大小为0.5～1.5×0.2～0.5um，

属鲍特氏菌属Bordela)，无鞭毛、芽胞。革兰氏染细菌阴性

。用甲苯胺蓝染细菌可见两极异染颗粒。专性需氧，初次分离培

养时营养要求较高，需用马铃薯血液甘油琼脂培养基（即鲍～金

氏培养基）才能生长。经37℃2～3天培养后，可见细小、圆形、

光滑、凸起、银灰细菌、不透明的菌落，周围有模糊的溶血环。

液体培养呈均匀混浊生长，并有少量粘性沉淀。生化反应弱，一

般不发酵糖类，但分解蔗糖和乳糖，产酸不产气，不产生H2S和吲

哚，过氧化氢酶试验阳性。
本菌常发生光滑型到粗糙的相变异：Ⅰ相为光滑型，菌落光滑，

有荚膜，毒力强；Ⅳ相为粗糙型，菌落粗糙，无荚膜，无毒力。

Ⅱ、Ⅲ相为过渡相。一般在疾病急性期分离的细菌为Ⅰ相，疾病

晚期和多次传代培养可出现Ⅱ、Ⅲ或Ⅳ相的变异。发生这种变异

时，细菌形态、菌落、溶血性、抗原结构和致病力等均出现变异

。
百日咳杆菌含有耐热的菌体（O）抗原和不耐热的荚膜（K）抗原

。前者为鲍特氏菌属共同抗原，后者仅存于百日咳杆菌。
本菌抵抗力弱。56℃30分钟、日光照射1小时可致死亡。对多粘菌

素、氯霉素、红霉素、氨苄青霉素等敏感，对青霉素不敏感。
与致病性有关的物质除荚膜、细胞壁脂多糖外，尚有多种生物学

活性因子。
4. available ELISA, RIA and latex agglutination test specimens of the bacteria specific

Sex antigen or PCR technology to check the bacteria nucleic acid for rapid diagnosis. [1] Nucleic acid amplification

Technology, ie, polymerase chain reaction (PCR)

The basic principle is to design and synthesize two oligonucleotides, which serve as primers and correspond to the target

Pathogen-specific microorganisms at both ends of a specific sequence, and then in vitro simulation of DNA in vivo

The process of replication is repeated amplification, the target sequence was magnified thousands or even millions of times and was seized

Measured
Bordela pertussis is a short oocyst bacillus, the size of 0.5 ~ 1.5 × 0.2 ~ 0.5um,

Bordela), flagellate, spores. Gram stain bacteria negative

. Toluidine blue staining of bacteria with bipolar heterotrophic particles. Specialized aerobic, initial isolation training

Nutritional requirements when raising high, need to use potato blood glycerol agar (ie, Bao ~ gold

Medium) to grow. After 37 ℃ 2 ~ 3 days after training, we can see small, round,

Smooth, raised, silver-gray bacteria, opaque colonies, surrounded by hazy hemolytic ring.

Liquid culture showed a uniform cloudy growth, and a small amount of viscous precipitation. Biochemical reaction is weak, one

Fermented like sugar, but the decomposition of sucrose and lactose, acid gas, do not produce H2S and indole

Indole, catalase test positive.
The bacteria often occur smooth to rough phase changes: Phase Ⅰ is smooth, colony smooth,

Capsule, virulent; Ⅳ phase is rough, rough colonies, no capsule, non-toxic.

Ⅱ, Ⅲ phase transition phase. Bacteria commonly isolated in the acute phase of disease are phase I, disease

Late and multiple subcultures can occur Ⅱ, Ⅲ or Ⅳ phase variation. This mutation occurs

When the bacteria morphology, colonies, hemolytic, antigenic structure and pathogenicity and so there are variations

.
Bordela pertussis contains a thermostable bacterial (O) antigen and a thermolabile capsular (K) antigen

. The former is a common antigen of the genusButtle, which is only found in Bordela pertussis.
The bacteria resistance is weak. 56 ℃ 30 minutes, 1 hour exposure to sunlight can cause death. To sticky bacteria

Su, chloramphenicol, erythromycin, ampicillin and other sensitive, insensitive to penicillin.
Pathogenicity associated with substances in addition to the capsule, cell wall lipopolysaccharide, there are a variety of biology

Active factor.