抗多群脑膜炎奈瑟菌诊断血清

广州健仑生物科技有限公司

【储藏条件】

2~8℃避光保存，在标明的有效期内使用。

【有效期】

24个月

【产品名称】

通用名：脑膜炎奈瑟菌诊断血清英文名：antisera for N.meningitidis

【产品说明】

本套血清用于A、B、C、W、X、Y等6个常见血清QUN（serogroup）脑膜炎奈瑟菌的血清群鉴定，将相应血清群脑膜炎奈瑟菌制备灭活抗原，免疫家兔所得，血清产品经免疫吸附去除了非特异性凝集成分，具有效价高，特异性强的特点。

抗多群脑膜炎奈瑟菌诊断血清

【规格】

每种血清群1瓶，每瓶2ml，均为使用液。

【使用方法】

1.产品在使用前，由冰箱拿出，恢复温度到室温后使用。

2.样品分离培养物，经镜检和生化鉴定，确定为脑膜炎奈瑟菌后，再进行血清分群检测，如果未能确定为脑膜炎奈瑟菌，不宜直接进行血清凝集检测，以免产生假阳性结果。

3.待鉴定细菌在血平板或巧克力平板上，5% CO₂，培养48小时。

4.用酒精擦拭玻璃片。

5.用蜡笔或防水笔将玻璃片分为8个方格。

6. 在玻片每个方格的下半部分，用移液器加5%的福尔马林溶液（基于生物安全目的）。

7. 用无菌或一次性10μl接种环挑取BAP平板上过夜培养的细菌菌落。

8. 在玻片上将细菌与5%的福尔马林溶液混匀，混匀后的液体应该不透明，在加抗血清前应保持细菌悬液不干燥。

9. 在玻片的上方加10μl血清群特异的抗血清，同时在阴性对照侧加BS或者生理盐水。

10. 缓慢的混合细菌悬液和抗血清，使上部的抗血清和下部的细菌悬液充分混合1-2分钟。不要做旋转晃动，以免不同血清群的血清会相互混合污染。

11.在灯光下，黑暗背景条件下观察结果。1-2分钟内呈2+及以上凝集现象为阳性，1-2分钟内呈现2+以下凝集现象为阴性。如果过了2分钟，才发生的凝集反应按阴性处理。

【凝集反应的强度等级】

当抗血清与细菌接触，会引起凝集反应，使细胞（细菌）凝集或呈簇，细胞（细菌）上清液变得清亮，细胞悬液浓度或使用的抗血清浓度不同，会产生不同的强度的凝集反应，见图示

4+ 所有的细胞都发生凝集，细胞悬液清亮。

3+ 75%的细胞发生凝集，细胞上清略微浑浊不清。

2+ 50%的细胞发生凝集，细胞上清略微浑浊不清。

1+ 25%的细胞发生凝集，细胞上清略微浑浊不清。

+/- 少于25%的细胞发生凝集，可见有颗粒状的成分。

0 没有肉眼可见的凝集，上清悬液浑浊、平滑。

【血清群确定】

1. 1-2分钟内，出现3+或4+凝集为阳性反应（强阳性反应）。对于B群脑膜炎奈瑟菌来说，如果出现2+及以上的凝集则可认为阳性。

2. 阴性反应是+/-、1+ 或 2+（弱凝集）的凝集程度。

3. 当菌株仅与一种抗血清出现凝集，但和生理盐水不凝集时才能鉴定为该种血清型。

4. 如果不能确定血清群，菌株记为不能分群脑膜炎奈瑟菌（NG）。

5. 关于不能分群脑膜炎奈瑟菌（NG）菌株。

6. 在生理盐水中凝集，无论与任何抗血清发生强反应，都应标记为自凝菌。

7. 在生理盐水中不自凝，和多种血清出现凝集，记为NG。

8. 不和生理盐水凝集，也不和任何一个血清凝集也记作NG。

【结果难以判断时解决方案】

脑膜炎奈瑟菌具有可变性（有荚膜与无荚膜，小菌落与大菌落，慢生长与快生长，强凝集与弱凝集），有时候很难清除解释结果，一些建议如下：

1. 挑取同一平板上的另一个细菌克隆进行重复凝集试验。

2. 如果玻片上的结果不明确，将试管中配置悬液，重复该试验。

3. 加20µl抗血清直接涂于玻片上，直接加一环细菌进行混均凝集。

4. 再次培养，第二天进行重新试验。

5. 如果当天的平板上有各种大小不一的菌落，每种菌落再次分离纯培养，第二天每种菌落进行试验。大菌落一般会有比较好的凝集反应，小菌落次之。

6. 如果试验中的问题还是不能解决，应当和对照菌株同时进行试验，确保试剂的正确性。

【血清质量控制】

在对未知的菌落进行血清分群之前，应选用一套脑膜炎奈瑟菌参考菌株（A, B, C, W, X, Y）和一株可分群的脑膜炎奈瑟菌进行质量控制检测。操作步骤：

1. 新购进的每一批次抗血清要用参考菌株进行检测。

2. 半年后重复质量控制检测

3. 如果血清管暴露于超过4℃环境，或者怀疑血清被污染时，也要对血清进行重新的质量控制。

4. 关于血清分群和质量控制，每一批次的抗血清需要使用所有的参考菌株进行实验室验证，记录质量控制验证结果。

【血清质量控制检测结果判读】

1. 通过质量控制检测

与同源性的抗原反应，1-2分钟内，出现3+或 4+程度的凝集；单一血清群的抗血清不与其他血清群的脑膜炎奈瑟菌反应，不与NG菌株凝集反应，盐水不自凝。

2. 分群血清质量控制检测失败

如果抗血清与一种或多种参考菌株凝集反应，或/和NG参考菌株反应，盐水自凝，则血清不能使用。

【其他所需材料】

洁净玻片、生理盐水（0.85%的氯化钠溶液）、5%的福尔马林溶液、接种环或移液器。

【注意事项】

1. 本产品只能作为脑膜炎奈瑟菌血清型判定的辅助方法，zui终的判定需形态学、生化方法和血清学方法共同进行。

 2. 本产品应避免冷冻。反复冻融会使血清产生沉淀。

3. 本产品在保存过程中可能会产生浑浊或沉淀，这并不表示该产品已被污染。离心或者过膜去掉浑浊或沉淀后，可以正常使用。

4. 本产品含有0.1%*作为防腐剂，丢弃时需倒入下水管，并用大量的水冲洗下水管。

广州健仑生物公司提供SSI血清产品，包括沙门氏菌，志贺氏菌，大肠杆菌，肺炎链球菌，嗜血杆菌等。并且提供德国有名血清品牌SiFin的核心血清产品，德国SiFin血清质量好，实验*，已被各高校实验室，研究所列为推荐血清产品！详情可咨询工作人员！

我司还提供其它进口或国产试剂盒：登革热、疟疾、流感、A链球菌、合胞病毒、腮病毒、乙脑、寨卡、黄热病、基孔肯雅热、克锥虫病、违禁品滥用、肺炎球菌、军团菌、化妆品检测、食品安全检测等试剂盒以及日本生研细菌分型诊断血清、德国SiFin诊断血清、丹麦SSI诊断血清等产品。

广州健仑生物长期供应各种违禁品检测试纸、违禁品检测卡、违禁品检测试剂盒、药筛试纸、药筛试剂盒、吗啡检测试剂盒、巴比妥检测试剂盒等。检测范围：吗啡、巴比妥、尼古丁、KET、mamp、MDMA、BZO、THC、MTD、BAR、MDMA、AMP、BUP、PCP、TCA、OXY、MET等等。

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百日咳外毒素是主要的致病因子，能诱发机体的持久免疫力，并

有多种生物活性，如提高小鼠对组织胺、5～羟细菌胺和敏感性，

促进白细胞增多，抑制巨噬细胞功能，损伤呼吸道纤毛上皮细胞

导致阵发性痉挛咳嗽等。细菌破裂后还能在宿主细胞浆中查到一

种热不稳定性毒素和其他几种抗原成份，可引起纤毛上皮细胞炎

症和坏死。
百日咳杆菌引起人类百日咳。病人，尤其是症状轻微的非典型病

人是重要的传染源。主要经飞沫传播。易感儿童接触病人后发病

率接近90%，一岁以下患儿病死率高。百日咳潜伏期1～2周。发病

早期（卡他期）仅有轻度咳嗽。细菌此时在气管和支气管粘膜上

大量繁殖并随飞沫排出，传染性zui大。1～2周后出现阵发性痉挛

性咳嗽（痉挛期），这时细菌释放毒素，导致粘膜上皮细胞纤毛

运动失调，大量粘稠分泌物不能排出，刺激粘膜中的感受器产生

强烈痉咳，呈现出特殊的高音调鸡鸣样吼声。形成的粘液栓子还

能堵塞小支气管导致肺不张和呼吸困难、紫绀。此外可伴有呕吐

、惊厥。4～6周后逐渐转入恢复期，阵咳减轻，趋向*，但有1

～10%病人易继发溶血性链球菌、流感杆菌等的感染。本病病程较

长，故名百日咳。在致病过程中，百日咳杆菌始终在纤毛上皮细

胞表面，并不入血。
感染百日咳后可出现多种特异性抗体，免疫力较为持久。仅少数

病人可再次感染，再发的病情亦较轻。粘膜局部的分泌型lgA具有

阻止细菌粘附气管粘膜细胞纤毛的作用，其抗感染作用比血清中

的抗体更重要。细胞免疫在百日咳杆菌感染中的作用还不甚明了

。
以分离培养为主，卡他期分离阳性率可达91.5%,而恢复期仅有约

26%。标本采用鼻咽试子或咳皿法，在鲍～金工培养平板上孵育，

根据菌落形态，涂片染细菌镜检作出初步诊断。确诊可用分离菌

与Ⅰ相免疫血清作血清玻片凝集或免疫荧光染细菌。

Pertussis exotoxin is the main virulence factor that can induce long-lasting body immunity

A variety of biological activity, such as mice to improve histamine, 5 ~ hydroxybacillary amine and sensitivity,

Promote leukocytosis, inhibit macrophage function, damage respiratory ciliated epithelial cells

Lead to paroxysmal spasms cough and so on. After bacterial rupture can be found in the host cytoplasm of a

Thermotolerant toxins and several other antigens can cause ciliary epithelial inflammation

Illness and necrosis.
Bordela pertussis causes human pertussis. Patients, especially atypical symptoms of mild symptoms

People are an important source of infection. Mainly by the droplets spread. Susceptible children after the onset of the disease

Nearly 90% rate, high mortality in children under one year old. Pertussis incubation period of 1 to 2 weeks. Disease

Early (catarrhal) only mild cough. Bacteria are now on the trachea and bronchial mucosa

Massive breeding and discharge with the droplets, the most contagious. 1 to 2 weeks after paroxysmal spasm

Sexual cough (spasm), when bacteria release toxins, resulting in mucocutaneous cilia

Movement disorders, a large number of viscous secretions can not be discharged to stimulate mucosal receptors

Strong spasmodic cough, showing a special high-pitched cock-like roar. The formation of mucus embolism also

Able to block a small bronchial aectasis and dyspnea, cyanosis. In addition may be associated with vomiting

Convulsions. 4 to 6 weeks after the gradual transfer to the recovery period, cough relieve, tend to heal, but there is 1

~ 10% of patients easily secondary to hemolytic streptococcus, influenza bacilli and other infections. The course of the disease more

Long, hence the name whooping cough. During the course of the disease, Bordela pertussis is always fine in the ciliated epithelium

The surface of the cell does not bleed.
Infection with pertussis can appear a variety of specific antibodies, the immunity is more lasting. Only a few

Patients can be infected again, the recurrence of the disease is also lighter. Mucous local secreted lgA has

The role of bacterial adhesion to tracheal mucosal cells to prevent cilia, the role of anti-infection than in serum

The antibody is more important. The role of cellular immunity in B. pertussis infection is not clear

.
In isolation and culture, the positive rate of catarrhal separation up to 91.5%, while the recovery period of only about

26%. Samples using nasopharyngeal son or cough dish method, incubation in the Bao ~ metalworking culture plate,

According to the colony morphology, smear bacteria to make a preliminary diagnosis of microscopic examination. Confirmed available isolates

And Ⅰ phase serum for serum slide agglutination or immunofluorescence staining bacteria.