肠出血性大肠杆菌O104：H4核酸检测试剂盒
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肠出血性大肠杆菌O104：H4核酸检测试剂盒流感主要品牌有：日本富士（瑞必欧）、日本生研、美国BD、美国NovaBios、美国binaxNOW、英国clearview、凯必利、广州创仑等。欢迎大家，广州健仑生物科技有限公司
- 产品描述
肠出血性大肠杆菌O104：H4核酸检测试剂盒
广州健仑生物科技有限公司
产品规格：48T/盒；
保存条件：避光 -20度 保存。
我司提供各种流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、冠状病毒、轮状病毒、杆菌、链球菌、热带病毒等等核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法），还有各种原料和质控品，随时欢迎您的来电： 杨
还提供其它进口或国产试剂盒：登革热、疟疾、流感、A链球菌、合胞病毒、腮病毒、乙脑、寨卡、黄热病、基孔肯雅热、克锥虫病、违禁品滥用、肺炎球菌、军团菌、化妆品检测、食品安全检测等试剂盒以及日本生研细菌分型诊断血清、德国SiFin诊断血清、丹麦SSI诊断血清等产品。
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以下是我司提供的部分PCR产品
肠出血性大肠杆菌O104：H4核酸检测试剂盒
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1.细胞嘅甲醛交联与超声破碎（*次）
1）拎出一平皿细胞（10cm平皿），加243 ul 37%甲醛，令到甲醛嘅终浓度为1%（培养基公司有9ml）。
2）37摄氏度哺育10min。
3）终止交联：加甘氨酸至终浓度为0.125M。450 ul 2.5M甘氨酸于平皿中。捞匀后，喺室温下放置5min即可。
4）吸尽培养基，用冰冷嘅PBS清洗细胞2次。
5）细胞刮刀有冇收集细胞于15ml离心理中（PBS依次为5ml，3ml同3ml）。预冻后2000rpm 5min有冇收集细胞。
6）又去上清。按照细胞量，加SDS Lysis Buffer。令到细胞终浓度为每200ul含2×106个细胞。噉每100ul溶液含1×106个细胞。再加蛋白酶抑制剂复合物。当MCF7生满板为5×106个细胞。本次细胞生得约为80%。即为4×106个细胞。就每理加400ul SDS Lysis Buffer。将2理捞喺一齐，公司800ul。
7）超声破碎：VCX750，25%功率，4.5S冲击，9S卡罅。公司14次。
2.除杂同抗体哺育（*次）
1）超声破碎结束之后，10000g 4度离心10min。抹得甩唔溶物质。
留罗300ul做实验，其余保存于-80度。
300ul中，100ul加抗体做为实验组；100ul唔加抗体做为对照组；100ul加4ul5MNaCl（NaCl终浓度为0.2M），65度处理3h解交联，走电泳，检测超声破碎嘅效果。
2）喺100ul嘅超声破碎产物中，加900ulChIPDilutionBuffer同20ul嘅五十×PIC。
再各加60ulProteinAAgarose/SalmonSpermDNA。4度扽转捞匀1h。
3）1h后，喺4摄氏度静置10min沉淀，700rpm离心1min。
4）取上清。各留罗20ul做为input。一理中加1ul抗体，另一理中就唔加抗体。4度扽转过夜。
いち）を取り出していちシャーレ細胞（10 cmシャーレ）に加え、243 ul 37％でホルムアルデヒド、ホルムアルデヒドのzui終濃度は1％（培地共有9ml）。
に）37℃10min孵化する。
さん）終瞭架橋：加グリシンからzui終濃度を0.125M。450 ul 2.5Mグリシン于平シャーレで?；旌厢?、室温で放置すれば5min。
4）を尽くして培地、冷たいPBS 2回洗浄細胞。
ご）細胞を集め、15 mlスクレーパー細胞遠心チューブ中（PBS顺次5、3mlと3ml）。予備冷却後2000rpm 5min収集細胞。
ろく）「清。細胞にLysis量によって、Buffer SDS。でzui終濃度を含む細胞ごとに200ul×106の細胞。こんな100ul溶液を含むすべての細胞がいち×106。エプロン抑制剤の複合物を追加します。仮にMCF7がいっぱい生えて板をご×106の細胞。今回の細胞の長さは約80 %だった。つまり4×106個の細胞です。そのためそれぞれ管加入400ul SDS Lysis Buffer。に管を混ぜて、共800ul。
ななしち）超音波破砕：VCX750 25％、電力、4.5S衝撃、9S隙間。合計14回。
2 .雑用と抗体を除く（初日）
いち）超音波破砕終瞭後、じゅう、000gよんしよ度遠心10min。不溶性物質を除去する。
留学を300ul実験で、殘りの保存は-はちじゅう度。
300ulに加え、100ul抗体を実験組; 100ulプラス抗体を対照群；100ul加入4ul5MNaCl（NaCl終濃度を0.2M）、65度処理3h解架橋、走る電気泳動、超音波破砕効果測定。
に）100ulの超音波破砕の制品の中で、加入900ulChIPDilutionBufferと20ulのごじゅう×PIC。
また各加入60ulProteinAAgarose / SalmonSpermDNA。よんしよ度回転混合1h揺れる。
さん）1h後、よんしよ℃静置10min瀋殿物、700rpm遠心1min。
よんしよ）とり清。各留を20ulをinput。一管の中に1ul抗体、一方の管の中には抗体を加えない。4度で夜を回る。
