甲型H1N1流感病毒核酸检测试剂盒

广州健仑生物科技有限公司

产品规格：50T/盒；

 保存条件：避光 -20度 保存。

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甲型H1N1流感病毒核酸检测试剂盒

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铁蛋白嘅提取
1）配制2%镪水铵液，并以1mol/L嘅NaOH或者HCl调pH值，啱啱为5.85。攞1g铁蛋白溶于100ml嘅2%硫酸铵液中。
2）加20%硫酸镉，令zui终浓度为5%，捞匀，4℃过夜。
3）1500g离心（4℃）2h，去上清。仍加2 %镪水铵至100ml，捞匀，离心，抹得甩不纯沉渣。
4）于上清液中重新加20%硫酸镉，重复步骤⑵，离心，去上清。
5）检查沉渣，置显微镜下检查，应具有典型嘅黄褐色结晶，结晶为六角形，双一四点结构，如结晶唔典型，应继续重复以上步骤。
6）以少量嘅蒸馏水溶解，再加50%饱和镪水铵溶液，令之沉淀，离心，去上清。
7）重复步骤⑹一次。
8）以少量蒸馏水溶解，常水透析24h后，以0.05mol/L pH7.5 PBS透析24h。
9）100000r/min离心2h，抹得甩上部冇色上清液（约3/4总量），置4℃过夜。
10）用微孔滤膜（孔径0.45μm）隔，令铁蛋白含量为65mg/ml-75mg/ml，分装，4℃保存唔冻做保存，以免铁蛋白结构遭破坏。
2.铁蛋白－抗体交联法
1）以0.3Mol/L pH 9.5硼酸盐缓冲液将铁蛋白稀释成20mg/ml-25mg/ml。
2）以一∶1000（W/W）嘅比例加XC液室温搅拌45min，离心去沉淀。
3）以0.3Mol/L pH 9.5硼酸盐缓冲液将提纯lgG衬成5mg/ml，以一∶4嘅比例（V/V）加IgG与铁蛋白－XC液，4℃搅拌48h。
4）以0.1Mol/L式碳铵溶液透析过夜，以除去多余嘅异氰酸盐，再以0.05Mol/l pH 7.5 PBS透析，令pH值恢复到生理水平。
5）超速离心以1.00×105g离心5h，去上清，沉淀以0.05Mol/L PBS悬浮，再次离心，以除去未结合嘅IgG。
6）以血清学同免疫学方法测定结合抗体嘅特异性、免疫活性与及识认效应，如果用步骤严格，结果系满意嘅。
3.铁蛋白－抗体结合物处理标本
1）将标本以5%福尔马林pH 7.2（4℃）PBS液入墙40min-60min。
2）用冻嘅PBS液洗涤，离心。
3）如系组织蚊，就喺解剖显微镜下切更忽，放入试管中，加埋铁蛋白－抗体结合物置室温20min，不时振荡，
4）以冻PBS液洗涤三次，离心。
5）沉淀以2.5%戊二醛入墙20min，以PBS洗涤。
6）再以锇酸入墙，脱水包壅。
都可以先超薄切片，再进行铁蛋白－抗体结合物染色。
唔识用如下：
1）将培养细胞以1%福尔马林PBS液入墙（4℃）。
2）PBS液洗涤离心。
3）以0.5ml，30%牛血清蛋白PBS液悬浮置入胶透析膜袋中，再将袋置于嗍水剂粉末上，对牛血清白蛋白成胶状物时，将透析袋移至2%戊二醛PBS液（pH7.5）中入墙3h。
4）拎出，切忽，以PBS液洗涤。
5）置干燥器中以矽胶糠。
6）包壅、切片、喺水上有冇收集切片置于经4%牛血清白蛋白PBS液处理嘅搂有胶膜嘅在网上（牛血清白蛋白嘅处理在于少铁蛋白结合物非特异性吸附于在网上）。
7）滴一滴铁蛋白－抗体结合物于在网上。
8）5min后，浮丝网于PBS液面，标本口当面同下，以除去多余嘅结合物。
9）冻做后，滴一滴醋酸双氧铀或者氢氧化铅以复染。
10）水洗、晾干、电镜观察。