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西尼罗河间接免疫荧光法检测试剂盒

西尼罗河间接免疫荧光法检测试剂盒

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西尼罗河间接免疫荧光法检测试剂盒,2002年8月2日,美国南部路易斯安那政府宣布全州进入紧急状态,控制正在该州迅速扩散的“西尼罗河病毒“。

  • 产品描述

西尼罗河间接免疫荧光法检测试剂盒

广州健仑生物科技有限公司

 

检查

1.实验室检查

白细胞数减少,脑炎型者脑脊液中淋巴细胞增多,蛋白增高。

2.免疫学检查

利用血清学抗体检测方法,常用ELISA(酶联免疫吸附实验)法,采用患者急性期和恢复期双份血清,两份血清同时进行检测,以恢复期血清较急性期特异性IgG抗体滴度升高4倍以上为阳性,有助于本病的诊断。

3.病原学检查

自潜伏末期至发病后第5天,从患者血液或脑脊液中分离出病毒,阳性率较高,对新分离病毒的鉴定一般采用已知血清进行中和实验。

4.分子生物学检查

RT-PCR(逆转录-聚合酶链反应)法检测,通过设计西尼罗河热病毒特异引物对血清或脑脊液标本进行RT-PCR试验,阳性率高,具有特异性诊断价值。

用途

西尼罗(WN)病毒IgG ELISA,利用了西尼罗重组抗原检测人体血清或血浆中的西尼罗抗体。本实验仅用于辅助诊断人感染了西尼罗病毒,不用于筛查血液或血液成分。仅供专业人员体外诊断使用。

概述

 感染了西尼罗病毒会导致包括脑炎等一系列症状的疾病,西尼罗病毒在世界广泛传播,已在50多个国家检测出该病毒。本试验经CDC提供的试剂检验与验证。本试验使用了一种称为WNRA的重组抗原,它可以作为西尼罗病毒感染的快速血清学指标,WNRA蛋白是一种重组抗原,它是由含有西尼罗病毒两个抗原的序列多肽构成。

实验的原理

检测西尼罗病毒IgG ELISA 是基于两步夹心法原理制造的。

提供的材料

  • 微孔板(96孔 12x8):即用  每孔均包被结合西尼罗重组抗原的单抗。2-8℃下保存至保质期。

注意:WNRA和NCA已包被于微孔板。

  • IgG样品稀释液:1支 25ml 即用 2-8℃下保存至使用。
  • IgG阴性质控:1支 30ul  2-8℃下保存至使用。要长时间储存,将其分装于小瓶里,在-70℃下储存。
  • IgG阳性质控:1支 30ul  2-8℃下保存至使用。要长时间储存,将其分装于小瓶里,在-70℃下储存。
  • 洗涤液(10X):1瓶 120ml  2-8℃下保存至使用。
  • EnWash:1瓶 20ml 2-8℃下保存至使用。
  • 酶联物:一瓶6ml 即用 2-8℃下保存至使用。
  • TMB底物液: 1支 9ml 即用  2-8℃下保存至使用。
  • 终止液;1支6ml 即用  2-8℃下保存至使用。

试剂应避免反复冻融。

西尼罗河病毒荧光玻片法检测试剂盒

西尼罗河病毒荧光玻片法检测试剂盒

西尼罗河间接免疫荧光法检测试剂盒

操作步骤:

  • 标记将要使用的板条,注意微孔板已经按照统一排列,如下所述包被西尼罗抗原和质控抗原。

西尼罗抗原

 

板条#1

板条#2

A

WNRA

WNRA

B

WNRA

WNRA

C

WNRA

WNRA

D

WNRA

WNRA

E

NCA

NCA

F

NCA

NCA

G

NCA

NCA

H

NCA

NCA

  • 将血清样品﹑阴性质控和阳性质控同样地用样每孔加入50ul稀释后的样品,以下为一个血清样品使用一个板条的*。
  • 品稀释液按1:300稀释。

 

 

板条1

板条2

血清样品

A

IgG N

样品1

B

IgG N

样品1

C

IgG P

样品2

D

IgG P

样品2

E

IgG P

样品2

F

IgG P

样品2

G

IgG N

样品1

H

IgG N

样品1

 

  • 封板,在湿润的温育器里37下温育1小时。
  • 温育后,用自动洗板机,使用洗涤液洗板6次。
  • 在每孔中加入50ul的酶联物。
  • 封板,在湿润的温育器里37下温育1小时。
  • 温育后,用自动洗板机,使用洗涤液洗板6次。
  • 每孔加入150ul的EnWash,在室温下温育5分钟
  • 温育后,用自动洗板机,使用洗涤液洗板6次。
  • 每孔加入75ul的TMB底物液。
  • 封板,在室温下,避光处温育10分钟。
  • 每孔加入50ul的终止液终止反应。
  • 在450nm处读取吸光率。

结果的计算

结果的变化将会非常大,以下结果仅供指引。

计算ISR值:

计算在同一实验里WNR抗原的两个阴性质控的平均值,计算同一实验里NC抗原的两个阴性质控的平均值,用WNRA/NCA,得出阴性质控的ISR值。同样地计算阳性质控和样品得ISR值,阳性质控的ISR值应高于3.0,阴性质控的ISR值应低于1.5。

结果的判断:

ISR

结果

解释

≤2.0

阴性

没有检测到IgG抗体

2.0-3.0

可疑

需确证实验

≥3.0

阳性

存在IgG抗体,建议做确定性实验




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M蛋白刺激机体产生的相应抗  体无保护作用。抗原变异编辑肺炎链球菌可能发生的变异  有荚膜变异:即从有荚膜有毒力的光滑(S)型菌变异为失  去荚膜毒力减低或消失的粗糙(R)型。细菌抵抗力编辑抵  抗力较弱,56℃15~30分钟即被杀死。对一般消毒剂敏感  。有荚膜株抗干燥力较强。对青霉素、红霉素、林可霉素  等敏感。致病性编辑致病物质1.荚膜(capsule) 是肺炎  链球菌主要的致病因素。无荚膜的变异株无毒力,感染实  验动物,如鼠、兔等,很快被吞噬细胞吞噬并杀灭。有荚  膜的肺炎球菌可抵抗吞噬细胞的吞噬,有利于细菌在宿主  体内定居并繁殖。2.肺炎链球菌溶血素(pneumolysin)   高浓度时对实验动物有致死性。对人的致病机理尚待确定  。3.紫癜形成因子(purpura-producing principle) 注  入家兔皮内,可产生紫癜及出血点并伴有内脏出血。紫癜  形成因子与人类肺炎球菌感染间的关系尚不明确。所致疾  病肺炎链球主要引起人类大叶性肺炎。75%的成年人肺炎链  球菌肺炎及50%以上严重的肺炎链球菌菌血症是由1~8型肺  炎链球菌引起。

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