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曼氏裂头蚴IgM抗体ELISA检测试剂
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曼氏裂头蚴IgM抗体ELISA检测试剂
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【检验方法】
- 洗涤液配制:用蒸馏水或去离子水将浓缩洗涤液(2号液)按1:10稀释(如取50ml浓缩液与450ml蒸馏水或去离子水),充分混匀即为工作洗涤液。
- 样本稀释:用样本稀释液(5号液)将待检血清按1:100稀释(如5μl血清+495μl样本稀释液),充分混匀。 阴性、阳性对照品不用稀释,直接加样。
- 加样反应:每次试验设阴性对照2孔、阳性及空白对照各1孔(分别加入阴性、阳性对照及样本稀释液100μl)。样本检测孔每孔加已稀释血清样本100μl。37℃避光反应30分钟。甩去孔内液体,每孔注满工作浓度洗涤液洗涤3次,每次均需停留1分钟;最后一次甩净,拍干。
- 加酶反应:除空白对照孔外,其余每孔加酶结合物(1号液)1滴,37℃避光反应30分钟。甩去孔内液体,如上洗涤,拍干。
- 显色反应:加底物(3号液)和显色剂(4号液)各1滴,混匀,37℃下避光显色10分钟。
- 加终止液(6号液)1滴,以空白对照调零,用酶标仪于450nm波长(630nm作为参比波长)读取OD值。
【参考值】
- Cut-off 值 (COV)=阴性对照平均OD值×2.1 (阴性对照孔OD值<0.07时按0.07计)。
- 有效性判定:
空白对照孔OD值<0.05(若大于0.05则实验无效);
阴性对照孔OD值≤0.10(若大于0.10则实验无效);
阳性对照孔OD值≥0.3(若小于0.3则实验无效)。
【检验结果的解释】
样本OD值≥COV值时,判为曼氏裂头蚴IgM抗体阳性