动物组织和细胞基因组 DNA 提取试剂盒

Tissue Genomic DNA Extraction Kit

（快速型）（适合从动物组织和细胞中提取基因组 DNA）

试剂盒组成 :50 (50 次)

储存条件：本试剂盒在室温（15-25 ℃）下可保存一年。

产品特点：TM Tissue Genomic DNA Extraction Kit 采用*的疏水膜技术，高效去除组织蛋白等各种干扰物，提取高纯度的 DNA。试剂盒采用*的缓冲系统，可从多种不同类型动物组织和细胞中快速速提取基因组DNA。

注意事项：

1.实验前准备工作：在实验开始前，详细阅读该手册熟悉各步骤，并准备好所有的试剂盒组分，1.5 ml 和 2 ml 灭菌离心管，以及 37 ℃和 65 ℃ 的温浴条件。

2.KBL1 和KW1 在低温时可能产生混浊或沉淀，可在37-50℃温浴片刻。

3.Buffer KW *次使用前请按瓶上标签加入 50 ml 无水乙醇。每次使用后，请立即拧紧盖子。

操作步骤：

（一）平衡吸附柱

1.取一 TM Mini Column 柱装在一个 2 ml 收集管上（已备）。加入 300 μl Buffer KB 平衡液至柱子内，室温 13 000 rpm 离心 1 min，使平衡液*流过柱子。弃收集管中的滤液，将空柱套回收集管内。

注意：柱子不平衡，将导致 DNA 产率减少。

（二）样品处理

2.A. 组织破碎:  可根据不同样品选择以下方法：

1)液氮研磨: 组织直接放入研钵中，加入少量液氮，迅速研磨，待组织变软，再加少量液氮，再研磨，如此三次，按 5-50 mg 组织/1ml 加入 KBL1，

混匀，静置 2 min, 转入离心管, 13,000 rpm, 常温离心，2  min (低温可能造成

KBL1 结晶,应在 50℃下保持 KBL1 溶解状态)。

2)直接研磨: 对于新鲜的动物组织, 可以按照 5-50 mg 组织/1ml 加入

KBL1，直接研磨后,转入离心管, 13,000 rpm 常温离心，2 min。

3)匀浆：组织样品按每 5-50 mg 组织加入 1 ml KBL1。用电动匀浆器充分匀浆约需 1-2 分钟。匀浆液转入离心管, 13,000 rpm  常温离心，2 min。(效果，强烈推荐)

B. 裂解细胞：培养贴壁细胞：不须消化，可直接用 KBL1 进行消化、裂解，KBL1 体积按 10 cm2/ml 比例加入； 悬浮细胞可直接收集、裂解，每1ml KBL1 可裂解 5×106 动物细胞, 裂解液加入后，静至 2min. 转入离心管, 13,000 rpm 常温离心，2 min。

注意：基因组 DNA 的纯度取决于 KBL1 的体积和标本的量，理论上KBL1 的体积越大，标本的量越少， DNA 质量越好！ 不同的组织有不同的比例，请在正式实验前摸索。

（三）吸附

3.将上清液或裂解液转移到已平衡过的吸附柱內，室温 13 000 rpm 离心 30 s，使裂解液*流过柱子。保留柱，弃去收集管中的过滤液，将吸附柱重新放入收集管。

注意：1）室温太低可能造成 KBL1 混浊或沉淀，在 37 ℃温浴片刻即可。 2）如混合液体积过大，可以分成数次上柱，每次上样量不要超过 700 μl。

4.（可选）加入 30 μl  浓度为 20-50 μg/ml 的RNase A  于柱的膜上，37 ℃放置 5-10 min。

注意：本试剂盒没有配备 RNase A 溶液。一般来说，这一步没有必要， 因为本试剂盒的纯化柱对 RNA 没有吸附能力。如果实验要求不能残留微量RNA，可采用这一步处理。

(四) 漂洗

5.加入 700 μl Buffer KW1，室温 13 000 rpm 离心 30 s，弃去收集管中的过滤液，保留柱。

6.加入 700 μl Buffer KW，室温 13 000 rpm 离心 30 s，弃去收集管中的过滤液，保留柱。

注意：Buffer KW 在*使用之前必须加入 50 ml 无水乙醇，并置于室温下保存。

7.（可选）重复用 700 μl 70%乙醇（室温）洗涤柱子。室温 12 000 rpm

离心 1 min。

8.弃收集管中的滤液，将空柱套回 2 ml 收集管内。室温下，高转速或 13 000 rpm 离心 2 min 以甩干柱子基质残余的液体。

注意：此步骤不可省，否则将导致乙醇残留于 DNA 中，影响后续反应。

(五)洗脱

9.把柱子装在一个新的 1.5 ml 离心管上，加入 50 μl 的 KE（可用灭菌的 TE 10 mM Tris-HCl，pH 8.0 或纯水代替，纯水可预先用 NaOH 调 pH 值至 8.0），65 ℃放置 5-10 min，13 000 rpm 离心 1 min 以洗脱 DNA。（也可以将 KE 预热至 65℃，再加至膜上，可以减少放置时间至 1min）

注意：小心加 KE 到柱中吸附膜的中间部位，并确保液体将膜全部覆盖。

10.DNA 可保存于 4 ℃，若长时间保存，可冻存于-20 ℃。

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