健仑细菌基因组 DNA 提取试剂盒（快速型）

试剂盒组成 ： 50 (50 次)
TM Mini Column 50
2 ml Collection Tube 50
Buffer KB (Column solution) 15 ml
Buffer KBL1 (Lysis solution) 2 x 30 ml
Buffer KW1 (Wash solution) 50 ml
Buffer KW (Wash solution ) 使用前加入 50 ml 无水乙醇
Buffer KE (Elution solution) 15 ml
储存条件： 本试剂盒在室温（15-25 ℃）下可保存一年。

健仑细菌基因组 DNA 提取试剂盒（快速型）
产品特点：
TM Microbial Genomic DNA Extraction Kit 采用*的疏水膜
技术，高效去除菌体蛋白和 RNA 等各种干扰物，提取高纯度的 DNA。试剂
盒采用*的缓冲系统，可从包括大肠杆菌等多种革兰氏阴性细菌中快速提
取基因组 DNA。
注意事项：
1. 实验前准备工作：在实验开始前，详细阅读该手册熟悉各步骤，并
准备好所有的试剂盒组分，1.5 ml 和 2 ml 灭菌离心管，以及 37 ℃和 65 ℃
的温浴条件。
2. KBL1 和 KW1 在低温时可能产生混浊或沉淀，在 37-65 ℃温浴片刻
即可。
3. Buffer KW *次使用前请按瓶上标签加入 50 ml 无水乙醇。每次使
用后，请立即拧紧盖子。
操作步骤： 
（一）平衡吸附柱 
1. TM Mini Column 柱装在一个 2 ml 收集管上（已备）。
加入 300 μl Buffer KB 平衡液至柱子内，室温 13 000 rpm 离心 1 min，使平
衡液*流过柱子。弃收集管中的滤液，将空柱套回收集管内。
注意：柱子不平衡，将导致 DNA 产率减少。
（二）裂解
2. 对于革兰氏阴性菌， 取 0.5-1 ml 新鲜菌液于 1.5-2 ml 离心管中，10
000 rpm 离心 5 min 收集菌体，加入 800-1000 μl Buffer KBL1，上下混匀, 静
置 2min 后室温下 13,000 rpm 离心 3-5min, 弃去沉淀，上清液待转移。
特别说明：
1） 微生物基因组 DNA 的纯度取决于 KBL1 的体积和菌体的量，理论
上 KBL1 的体积越大，菌体的量越少， DNA 质量越好。
(三) 吸附
3. 将第 2 步的上清液一次或多次转移至吸附柱内，室温下 13,000 rpm 
离心 30s，使裂解液*流过柱子。每次不超过 700 μl, 保留柱，弃去收集
管中的过滤液，将柱重新放入收集管。
（四）漂洗
4．加入 700 μl Buffer KW1, 室温下 13,000 rpm 离心 30s，弃去收集管中
的过滤液，保留柱。
5. 加入 700 μl Buffer KW1, 室温下 13,000 rpm 离心 30s，弃去收集管中
的过滤液，保留柱。注意： Buffer KW 在使用之前必须加入 50 ml 无水乙
醇，并置于室温下。
6. (可选): 加入 700 μl 的 70%的乙醇溶液（自备），室温下 13,000 rpm 离
心 30s，弃去收集管中的过滤液，保留柱。（此步骤不是必须的，但是 70% 的
乙醇漂洗可能有益于提高 DNA 纯度）
7. 弃收集管中的滤液，将空柱子套回 2 ml 收集管内。室温下，高转速
离心 2 min 以甩干柱子基质残余的液体。 （注意：省去这一步将导致残留
乙醇于 DNA 中）
（五）洗脱
8. 把柱子装在一个干凈的 1.5 ml 离心管上，加入 50 μl 的 KE (或者用
灭菌的 TE 10 mM tris-HCl, pH 8.0 或纯水代替，纯水可能影响 DNA 洗脱效
率)，65℃放置 5-10 min, 13,000 rpm 离心 1min 以洗脱 DNA。(也可以将 KE
预热至 65℃，再加至膜上，可以减少放置时间至 1min）
注意：小心加 KE 到柱中吸附膜的中间部位，并确保液体将膜全部覆盖。
9. DNA 应保存于 4 ℃，若长时间保存，可冻存于-20 ℃。

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