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恙虫病检测试剂(美国进口)

恙虫病检测试剂(美国进口)

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恙虫病、乙脑(日本脑炎)、钩端螺旋体、锥虫等病原微生物的ELISA检测试剂。

  • 产品描述

STG-1
恙虫IgG ELISA Scrub Typhus IgG ELISA
ELISA
用ELISA方法检测人体血清中恙虫病IgG。 96份/盒
STM-1
恙虫IgM ELISA

Scrub Typhus IgM ELISA

ELISA
用ELISA方法检测人体血清中恙虫病IgM。 96份/盒

 

1、应用范围
恙虫病IgG ELISA试剂盒可用来检测人是否感染恙虫病东方螺旋体(OT),它是检测血浆或血清中抗恙虫病东方螺旋体源性重组抗原的IgG抗体的一种ELISA检测系统。此实验可辅助诊断人是否感染了恙虫病东方螺旋体,此试剂盒不能用于筛查血液或血液成分,仅供体外诊断用。
2、前言说明
    恙虫病是一种由恙虫病东方体引起的传染病,恙虫病东方体一种约细菌大小的寄生虫,隶属于立克次氏体科。如果被幼虫状态的恙螨(啮齿目的寄生虫)咬了,就会传染恙虫病。被恙螨咬后的典型表现是皮肤溃疡,之后会出现高烧、全身斑点皮疹和淋巴结肿大。人在接触二级营养体后,一般都会出现恙虫病。但是这种疾病也流行于沙漠、高山和热带地区。恙虫病是一种世界性的疾病,但主要存在于东南亚和西太平洋。在东南亚的一些地区,大约20%的疾病都是由恙虫病引起的,并且是地方性的。在zui初被咬后,疾病大概会持续10至20天。如果加以治疗,则高烧会在36小时内退去,但如果不治疗的话,则会出现并发症乃至死亡。
3、实验原理
恙虫病IgG ELISA试剂盒是一种定量检测人血清和血浆中抗OT IgG抗体的酶免试剂。包被板的微孔中包被了重组抗原混合物(如下)。在检测的时候,血清应当用Inbios的样品稀释液稀释后再加入微孔中,具体请见如下的“血清应用范例”。在温育并洗板后,在微孔中加入HRP标记的IgG酶联物。温育并洗板,再向微孔中加入TMB底物液并温育。后再加入酸性终止液,并在450nm检测底物反应的程度。所检测到的OD值与样品中IgG抗体的浓度成正比。阴性质控和弱阳性质控以内在质控形式提供,其目的是为了监测试剂盒成分的完整性。如果样品与抗原间发生了反应,则样品应当被认为是阳性的。
4、试剂盒成分
恙虫病IgG ELISA试剂盒提供了足够做96人份所需要的试剂。试剂盒成分如下:
恙虫病检测特定材料:
1)恙虫病检测抗原包被的包被板:带板盖的板架,恙虫病东方体(OT)源性重组抗原包被的96孔包被板。2-8℃下储存,有效期内稳定。
2)样品稀释液:1瓶,15ml,用于样品稀释。可能会出现沉淀,使用前轻轻混合。2-8℃下储存,有效期内稳定。
3)HRP标记的即用型酶联物:1瓶,6ml,内含即用型的HRP标记的抗人IgG溶液。2-8℃下储存,有效期内稳定。
4)TMB底物液:1瓶,9ml液态底物液,2-8℃下储存,有效期内稳定。注意:底物液必须始终储存于避光试剂瓶中。
5)终止液:1瓶,内含6ml即用型的终止液,2-8℃下储存,有效期内稳定。
6)10倍浓缩的洗涤液,1瓶,120ml,2-8℃下储存,有效期内稳定。
7)EnWash:1瓶,20ml EnWash溶液,在加酶联物后的洗板步骤间使用。2-8℃下储存,有效期内稳定。
8)阴性质控:1支,30ul热灭活阴性血清,阴性质控可辅助监测试剂盒的完整性,储存于-70℃的环境下。
9) 阳性质控:1支,30ul热灭活阳性血清,阳性质控可辅助监测试剂盒的完整性,储存于-70℃的环境下。
注意:实验开始前,所有的试剂和质控都必须平衡至室温,反复倒置使溶液混合均匀。
5、实验所需器材但试剂盒不提供
1)可在450nm处读数的酶标仪
2)生物学或高纯度水
3)37℃无二氧化碳的湿度孵育箱
4)洗板机
5)1-10ul的单道移液器,50-200ul的单道和多道移液器。
6)计时器
6、样品的采集与准备
1)此实验必须用血清来做。全血和血浆样本不能直接检测。
2)为了避免溶血,应当从凝固的红细胞中尽快分离出血清。
3)样品采集后应当尽快检测掉,不要让血清在室温下停留过长时间。
4)实验要使用血清,采血时注意静脉采血的常规注意事项。样品可在2-8℃下存放7天,冻存于-20℃或更低温度时可存放30天。为了延长血清的有效期,我们可以将其冻存于-70℃的环境下。避免反复冻融样品。
5)不要使用溶血的或脂血样品。
6)实验开始前,将冻存的样品融解至室温,并旋涡或倒置混合样品。
7)如果血清需运输,必需密封于容器,贴上联合管制的标签作为传染性物质运输。
7、实验步骤
使用前,将所有的试剂成分和样品都平衡至室温。实验前反复倒置以便试剂和样品混合均匀。
试剂准备:
1)即用型洗涤液的配置:用生物学或高纯度水将10倍浓缩型的洗涤液稀释成即用型的洗涤液。为了制备即用型的洗涤缓冲液,我们可以将120ml 10倍浓缩的洗涤液加入到1080ml蒸馏水或去离子水中,冲洗掉所有晶体,旋涡混合溶液以至所有晶体都溶解掉。制备好的洗涤液可在室温下稳定储存4个月。注意:如果洗涤液里有微生物生长,则应当弃取。
2)包被板的准备:将实验所需数目的板条置于板架上。将剩余的板条立即装入包装待中,并储存于2-8℃的环境下,有效期内稳定。
注意:长期储存的血清样品不能反复冻融,血清可以储存于-70℃的环境下。
操作步骤:
将所有的试剂成分和样品都平衡至室温。实验前反复倒置以便试剂和样品混合均匀。阳性质控、阴性质控和未知血清都必须做双份检测。
1)确定好所需检验的血清样品量。
2)按照如下的“血清应用范例”组织血清样品(仅供参考,用户也可以自己设置相应的位置),用户可以杂试管或ELISA塑料板内稀释样品。
3)用样品稀释液将样品稀释50倍(您可以在8ul的血清中加入392ul样品稀释液),混合。注意:血清和质控品不能低于4ul。
4)用移液器将稀释好的血清和质控各50ul加入到相应的微孔中。
5)用封板胶仅在开放的微孔表面封板,所有板条的底部是没有覆盖的。
注意:这样是为了保证温度的分布在每个孔的底部和血缘相等地散播。一旦顶部密封阻碍了蒸发,任何多余的封板胶必需被剪掉。
6)37℃下保湿温育板条30分钟,在温育器的底部放置水浴箱可达湿润的作用。注意:不要将微孔板叠放,必须单独地分层平辅。这对于温度的平等分布非常重要。不要使用CO2或任何气体,不要让板条接触任何湿润的物质,如湿纸巾等。
7)温育后,用洗板机洗板6次,每次每孔300ul。
8)在每一微孔中加入50ul即用型的酶联物。
9)用封板胶仅在开放的微孔表面封板,所有板条的底部是没有覆盖的。(同步骤5)
10)            37℃下保湿温育板条30分钟。(同步骤6)
11)            温育后,用洗板机洗板6次,每次每孔300ul。
12)            用多道移液器在每一微孔中加入150ul Enwash溶液。
13)            室温温育5分钟。
14)            温育后,用洗板机洗板6次,每次每孔300ul。
15)            用多道移液器在每一微孔中加入75ul TMB底物液。
16)            室温避光温育10min。
17)            温育后,用多道移液器在每一微孔中加入50ul终止液,室温温育1min。
18)            温育后,450nm处测    OD值。
8、临界值的计算和结果说明
临界值的计算:将没有受感染的正常人血清的平均OD值+3SD来确定临界值。例如:临界值=平均OD值+3SD。下面临界值是用印度人的正常血清检测得到的,临界值:0.370
注意:上述临界值并不是用很多人群检测得到的,所以,我们建议用户能建立自己地域内的临界值。
结果说明:
1) OD值高于临界值的样品被认为是有活性(阳性)的样品,低于临界值的样品被认为是无活性(阴性)的样品。
2) 有活性的(阳性)样品必须重复检测来确定结果是否正确,靠近临界值的数值被认为是可疑样品,此类样品也必须重复检测(做三份或更多份)。
总结:
实验必须满足如下表格中的要求:以下标准不能*说明试剂可能已退化或操作出现了错误,并且实验必须重做。
因素
可接受范围
阴性质控的OD值(NC)
0.500
阳性质控的OD值(PC)
0.800
Discrimination Capacity(RP/N
8.00
 
 
本译文仅供参考,详情请以原文为准。
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