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基孔肯雅热IgM诊断试剂盒

基孔肯雅热IgM诊断试剂盒

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基孔肯雅热IgM酶联诊断试剂盒

  • 产品描述

 基孔肯雅热IgM酶联诊断试剂盒 说明书

【预期用途】

基孔肯雅IgM抗体ELISA检测试剂盒主要用于定性检测人血清和血浆中抗基孔肯雅病毒的IgM抗体。

【实验原理】

此试剂盒基于ELISA技术。包被板中包被了抗人IgM抗体,如果人血清或血浆中含有IgM时,则会与其特异性结合,洗板将未结合的物质洗去, 然后加入基孔肯雅抗原溶液,洗板洗去未结合的物质,然后加入链霉亲和素和基孔肯雅抗体酶联物。洗板后,加入TMB底物液,颜色变成蓝色,加入终止液终止反 应,颜色由蓝色转为黄色,zui后用酶标仪在450nm处读数。

【试剂组成】

包被板:12×8可拆卸,包被了抗人IgM抗体,密封在可重封铝箔袋中

基孔肯雅溶液1:1瓶包含6mL的基孔肯雅抗原溶液,即用,白盖

基孔肯雅溶液2:1瓶包含6mL的生物素化的基孔肯雅抗体,即用,蓝色,白盖

基孔肯雅IgM阳性质控:1瓶,1.5mL,黄色,即用,红盖

基孔肯雅IgM临界质控:1瓶, 2mL,黄色,即用,绿盖

基孔肯雅IgM阴性质控:1瓶,1.5mL,黄色,即用,蓝盖

样本稀释液: 1瓶包含100mL的即用缓冲液,用于稀释样本,pH7.2±0.2,黄色,白盖

洗涤液:1瓶,包含50mL  20倍浓缩的缓冲液,(pH7.2±0.2)用于洗板,白盖

链霉亲和素结合液:1瓶包含6mL过氧化物酶结合的链霉亲和素,即用,红色,黑盖

TMB底物液:1瓶包含15mL  TMB,即用,黄盖

终止液:1瓶包含15mL,即用,内含硫酸,0.2mol/l,红盖

【需要的设备和材料】

             固定板

             封板片

             酶标仪(450/620nm)

             37℃孵箱

             洗瓶或自动洗板机

             10~1000μL的移液器

             漩涡混匀器

             蒸馏水或去离子水

             一次性试管

             计时器

【储存和稳定性】

试剂在有效期内,储存于2-8℃稳定

【试剂准备】

洗涤液的准备

用双蒸水稀释洗涤液,例子:10ml洗涤液+190ml双蒸水。稀释好的洗涤液在室温下5天内有效。

【样本的采集和准备】

这个实验中使用的样本是人血清和血浆,如果实验在样本采集后的5天内进行,则需要储存在2-8℃,否则,必须于-20℃到-70℃深度冻存。如果样本是深度冻存的,在使用前,则需要充分混匀,避免反复冻融。

不推荐使用热灭活的样本

【样本的稀释】

将10μL样本跟1ml的样本稀释液混匀,并用漩涡混匀器充分混匀。

【实验步骤】

在开始试验前,请仔细阅读试验说明。结果的可信度是依赖于严格地按照实验说明来进行的,铺板时zui少留1个孔为空白对照(A1)1个阴性质控孔(B1)2个临界质控孔(C1+D1)1个阳性质控孔(E1)。开始试验前,请将所有试剂都平衡到室温

1.         吸取50μL的质控品和稀释过的样本到相应的孔中,留A1孔做空白对照孔

2.         封板

3.         在37±1℃下孵育1小时±5分钟

4.         当孵育完成时,揭去封板片,弃去反应液,每孔300μL洗涤液,洗板3次,避免溢出。每孔浸泡的时间都必须>5秒,zui后拍板将残留的液滴都拍去。

5.         吸取50μL基孔肯雅溶液1到除了空白对照孔的每个孔中,盖板

6.         在室温孵育30分钟

7.         重复步骤4

8.         将基孔肯雅溶液2跟链霉亲和素结合物混匀10分钟

9.         吸取50μL基孔肯雅溶液2跟链霉亲和素的复合物到除了空白对照孔的每个孔中,盖板。

10.     室温孵育30分钟

11.     重复步骤4

12.     吸取100μL  TMB底物液到每个孔中

13.     避光孵育15分钟(精确)

14.     加入100μL终止液到每个孔中,与加TMB底物液时的间隔和顺序都必须一样

15.     用酶标仪在加入终止液后30分钟内与450/620nm处检测

【检测】

调整酶标仪,以空白对照孔调零,以450nm处检测所有孔的吸光度值。

【结果】

1.         检测生效的条件

只有以下条件符合,检测的结果才能认为的有效的

 空白对照孔             吸光度值<0.100

 阴性质控孔             吸光度值<临界质控

 临界质控孔             吸光度值0.150-1.300

 阳性质控孔             吸光度值>临界质控

如果以上条件不符合的,那么试验结果则是无效的,需要重新检测

2.         结果的计算

临界质控平均吸光度值的计算,例子:吸光度1:0.39;吸光度2:0.37

                                  (0.39+0.37)/2=0.38

                                 平均吸光度值为0.38

3.         结果的说明

样本如果是比临界值高出10%,则认定为阳性,

样本如果是在临界值上下10%之内,则认定为灰色区(推荐在2-4周之后再次检测新鲜的样本,如果样本仍然是灰色区,可以直接认为是阴性)

样本如果是比临界值低出10%,则认定为阴性

4.         结果的单位

病人样本平均吸光度值×10     = U

   临界值

例子: 1.216×10    =32U

0.38

临界值: 10   U

灰色区:9-11   U

阴性:   <9   U

阳性:   >11  U

本译文仅供参考,详情请以原文为准。

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